Жеңіл парақтың люминесценттік микроскопиясы - Light sheet fluorescence microscopy - Wikipedia

Жеңіл парақты люминесценттік микроскопты орнату принципі.

Жеңіл парақтың люминесценттік микроскопиясы (LSFM) Бұл флуоресценттік микроскопия аралықтан жоғарыға дейін техника[1] оптикалық ажыратымдылық, бірақ жақсы оптикалық секциялар мүмкіндіктер мен жоғары жылдамдық. Айырмашылығы эпифлуоресценттік микроскопия тек үлгінің жіңішке тілімі (әдетте бірнеше жүз нанометрден бірнеше микрометрге дейін) бақылау бағытына перпендикулярлы жарықтандырылады. Жарықтандыру үшін, а лазер ақшыл парақ қолданылады, яғни лазерлік сәуле, ол тек бір бағытқа бағытталған (мысалы, цилиндрлік линзаны қолдану арқылы). Екінші әдіс жарық парағын жасау үшін бір бағытта сканерленген дөңгелек сәулені қолданады. Тек іс жүзінде бақыланатын бөлім жарықтандырылғандықтан, бұл әдіс тірі үлгіні тудыратын фотодығуды және стрессті төмендетеді. Сондай-ақ, оптикалық секцияның жақсы мүмкіндігі фондық сигналды азайтады және осылайша салыстыруға болатын жоғары контрастты кескіндер жасайды конфокальды микроскопия. LSFM үлгілерді нүктенің орнына жарықтың жазықтығын қолдану арқылы сканерлейтіндіктен (конфокальды микроскопиядағыдай), суреттерді нүктелік сканерлеу әдістеріне қарағанда 100-ден 1000 есе жылдамдықпен ала алады.

Әр түрлі микроскопиялық жарықтандыру әдістерін салыстыру (LSFM: жарық парағының люминесценттік микроскопиясы, WF: кең өрісті микроскопия, CF: конфокальды микроскопия). LSFM жақсы z-секциясын біріктіреді (конфокальды) және тек бақыланатын жазықтықты жарықтандырады

Бұл әдіс қолданылады жасуша биологиясы[2] және бұзылмаған, көбінесе химиялық тазартылған мүшелерді, эмбриондарды және организмдерді микроскопиялау үшін.[3]

1994 жылдан бастап LSFM келесідей дамыды ортогоналды жазықтық флуоресценциясының оптикалық қимасы микроскопия немесе томография (OPFOS)[4] негізінен үлкен үлгілерге және кейінірек бір реттік жазықтықты жарықтандыру микроскопиясы (SPIM) сонымен қатар ішкі ұяшық ажыратымдылығымен.[5] Бұл флюоресценттік микроскопияға жарықтандыру схемасын енгізді, ол қазірдің өзінде сәтті қолданылып келді қараңғы өрісті микроскопиялау атымен ультрамикроскопия.[6]

LSFM орнату

Негізгі орнату

Әр түрлі LSFM ендірулерінің иллюстрациясы. Толығырақ мәтінді қараңыз. Аңыз: CAM = камера, TL = түтік линзасы, F = сүзгі, DO = анықтау мақсаты, S = үлгі, SC = үлгі камерасы, PO = проекциялау мақсаты, CL = цилиндрлік линза, SM = сканерлеу айна

Микроскопияның бұл түрінде,[7] жарықтандыру бақылау бағытына перпендикуляр түрде жасалады (мақаланың жоғарғы жағындағы сызбалық суретті қараңыз). А кеңейтілген сәулесі лазер цилиндрлік линзамен немесе а тіркесімімен тек бір бағытта бағытталған цилиндрлік линза және а микроскоптың объективі өйткені соңғысы оптикалық сапада және одан да жоғары деңгейде қол жетімді сандық апертура біріншісіне қарағанда. Осылайша фокустық аймақта жұқа жарық парағы жасалады, оны флуоресценцияны қоздыру үшін тек үлгінің жіңішке кесіндісінде (әдетте бірнеше микрометр жұқа) жасайды.

The флуоресценттік жарық содан кейін жарық парағынан шығарылатын стандартты микроскоп объективімен перпендикуляр түрде жиналады және бейнелеу сенсорына проекцияланады (әдетте ПЗС, электрондарды көбейту ПЗС немесе CMOS камерасы ). Қозу оптика / жарық парағына жеткілікті орын беру үшін жұмыс қашықтығы жоғары бақылау мақсаты қолданылады. LSFM көпшілігінде анықтау мақсаты, кейде қозу мақсаты сынама буферіне толығымен батырылады, сондықтан әдетте сынама және қозу / анықтау оптикасы буфермен толтырылған үлгі камерасына енгізіледі, оны қоршаған орта жағдайын бақылау үшін де қолдануға болады ( температура, көмірқышқыл газының деңгейі ...) өлшеу кезінде. The LSFM-ге үлгілік монтаждау төменде толығырақ сипатталған.

Сурет қалыптастыру үшін қоздыру бағдаршамы да, анықтау оптикасының фокустық жазықтығы да сәйкес келуі керек болғандықтан, үлгінің әр түрлі бөліктерін фокустауды анықтау мақсатын аудару арқылы жасау мүмкін емес, бірақ әдетте оның орнына бүкіл үлгі аударылып, айналдырылады.

LSFM негізгі идеясының кеңейтімдері

Соңғы жылдары осы схеманың бірнеше кеңейтімдері әзірленді:

  • Екі қарама-қарсы тарайтын жарық парақтарын пайдалану көлеңкелену сияқты типтік SPIM артефактілерін азайтуға көмектеседі (жоғарыдағы бірінші z-стекті қараңыз)[8]
  • Жарық парақтарының қарсы таралуына қосымша, екі қарама-қарсы жақтан анықтайтын қондырғы 2012 жылы ұсынылған.[9][10] Бұл үлгіні тезірек толық көлемде қайта құру үшін z- және айналу стектерін өлшеуге мүмкіндік береді.
  • Жарық парағын сонымен қатар қалыпты лазерлік фокусты жоғары және төмен сканерлеу арқылы жасауға болады.[11] Бұл сонымен қатар өзін-өзі қалпына келтіретін сәулелерді пайдалануға мүмкіндік береді (мысалы бессель сәулелері немесе Ұшақ сәулелері ) жарық парағының қалың үлгілерге енуін жақсартатын жарықтандыру үшін, өйткені шашыраудың жарық парағына кері әсері азаяды.[12][13][14] Бұл өзін-өзі қалпына келтіретін сәулелерді әлсірету-компенсациялау әдістерін қолдана отырып, қарқындылықтың жоғалуына қарсы тұру үшін өзгертуге болады, әрі қалың сынамалардан жиналған сигналды одан әрі арттырады.[15]
  • Жылы қиғаш жазықтықтағы микроскопия (OPM)[16] анықтау мақсаты жарық парағын жасау үшін де қолданылады: жарық парағы енді осы мақсаттан шамамен 60 ° бұрышпен шығарылады. Қосымша оптика бірдей бұрышпен анықтау үшін қолданылатын фокустық жазықтықты еңкейту үшін қолданылады.
  • LSFM сонымен бірге біріктірілді екі фотонды (2Р) қозу, бұл қалың және шашыраңқы үлгілерге енуді жақсартады.[17] Инфрақызыл толқын ұзындығында 2Р қоздырғышын қолдану мидың бейнелеу тәжірибелерінде көзге көрінетін тітіркендіргіштерге жауап беретін көк көзге көрінетін толқын ұзындықтарындағы 1Р қозуды ауыстыру үшін қолданылған.[18]
  • SPIM сияқты әдістермен біріктірілуі мүмкін флуоресценттік корреляциялық спектроскопия, флуоресцентті бөлшектердің кеңістіктегі шешілген қозғалғыштығын өлшеуге мүмкіндік беру үшін (мысалы, флуоресцентті моншақ, кванттық нүктелер немесе флуоресцентті таңбаланған ақуыздар) тірі биологиялық үлгілердің ішінде.[19][20]
  • Флуоресценцияның өмір сүру уақытының картасын өлшеуге мүмкіндік беретін, суретті күшейтетін қақпақты камерамен SPIM микроскопының тіркесімі туралы хабарлады (флуоресцентті өмір бойы бейнелеу, FLIM).[21]
  • LSFM біріктірілді супер ажыратымдылықтағы микроскопия оның шешімін Аббе шегінен тыс жақсарту әдістері.[22][23] Сондай-ақ ынталандырылған эмиссияның сарқылуының микроскопиясы (STED) және SPIM жарық көрді, бұл STED әсерінен жарық парағының қалыңдығын төмендетеді.[24] Тарауын қараңыз LSFM шешімінің күші төменде.
  • LSFM барлық мақсаттарға, тіпті кеңістіктік ажыратымдылық пен флуоресценцияны анықтау тиімділігін арттыру үшін сандық апертурасы бар, липсель негізінде, майды батыруға арналған мақсаттармен үйлесімді етіп өзгертілді.[25] Бұл әдіс жарық парағын анықтау мақсатына қатысты шыны жабындардың бетінде жарық парағының пайда болуын қамтамасыз ету үшін дәл бұрышпен еңкейтуді қамтиды.
  • LSFM біріктірілді Адаптивті оптика 2012 жылы 350 мм тереңдіктегі қалың және біртекті емес үлгілерде бейнелеу тереңдігін жақсарту әдістері.[26] Shack Hartmann толқындық сенсоры анықтау жолына орналастырылған және бағыттаушы жұлдыздар кері байланыс циклында қолданылады. Өзінің тезисінде[27] автор үлгіде келтірілген ауытқуларды түзету үшін LSFM жарықтандыру және анықтау жолында адаптивті оптика болу артықшылығын талқылады.

Үлгіні монтаждау

LSFM үлгісін монтаждаудың әр түрлі түрлері: ілулі гель цилиндріне салынған эмбрион, тірек гель цилиндрінде өсетін өсімдік, әйнектегі жабысқақ жасушалар, үлгі пакетіндегі сұйық үлгі

LSFM-де жарық сәулелерін бөлу және анықтау қиғаш жазықтықтағы микроскопия ) мамандандырылған монтаждау әдістеріне қажеттілік туғызады. Бүгінгі күні көптеген LSFM жарықтандырғыштар мен жарықтандырғыштар көлденең жазықтықта жататындай етіп салынған (жоғарыдағы суреттерді қараңыз), осылайша үлгі әдетте жоғарыдан үлгі камерасына ілінеді немесе үлгінің ішіндегі тік тірекке тіреледі камера. Барлық үлгілерді монтаждаудың бірнеше әдістері әзірленді:

  • Тұрақты (және ықтимал тазартылған) үлгілерді қарапайым тіреуішке немесе ұстағышқа жабыстыруға болады және кескіндеме кезінде олардың шешімінде қалуы мүмкін.
  • Ірі тірі организмдер әдетте тыныштандырылып, жоғарыдан үлгі камерасына ілінген (шыны немесе пластикалық) капиллярдан шығарылған жұмсақ гель цилиндріне орнатылады.
  • Жабысқақ жасушаларды үлгі камерасында ілулі тұрған кішкене шыны табақтарда өсіруге болады.
  • Өсімдікті өсіру ортасы бар мөлдір гельдерде өсіруге болады. Гельдер кескіндеу кезінде кесіліп тасталады, сондықтан олар шашырау және сіңіру арқылы жарық парағы мен кескін сапасын төмендетпейді.[28]
  • Сұйық үлгілер (мысалы үшін флуоресценттік корреляциялық спектроскопия ) жұқа пластик фольгадан жасалған кішкене пакеттерге салынуы мүмкін сыну көрсеткіші үлгі камерасындағы қоршаған иммерсиялық ортаның[20]

Үлгі стандартты микроскопиядағыдай орнатылатын кейбір LSFM құралдары дамыды (мысалы, жасушалар төменгі жағында көлденең өседі) петриден жасалған тағам ) және қоздыру және анықтау оптикасы жоғарыдан тік жазықтықта салынған. Бұл сонымен қатар LSFM стандартын біріктіруге мүмкіндік береді төңкерілген микроскоп және мамандандырылған монтаждау процедураларына қойылатын талаптардан аулақ болады.[19][29][30][31]

LSFM кескін қасиеттері

Кескіннің типтік режимдері

Көптеген LSFM үлгілерді кескін жазықтығы арқылы жылжыту арқылы үлгінің 3D кескіндерін жасау үшін қолданылады. Егер үлгі кескін сенсорының көру аймағынан үлкен болса, үлгіні де бүйірге ауыстыруға тура келеді. Альтернативті тәсіл - сурет стегін құру үшін кескін жазықтығын үлгі арқылы жылжыту.[31]

Ұзақ эксперименттерді, мысалы, әр 10 секунд сайын -10 мин сайын жазылған стектермен жүргізуге болады. Бұл уақыт бойынша өзгерістерді 3D форматында немесе 4D микроскопиясы деп аталатын зерттеуге мүмкіндік береді.

Кескін алынғаннан кейін кескіннің әртүрлі стектері болады тіркелген бір 3D жиынтығын құру үшін. Мақсат рөлдерін өзара ауыстыру арқылы іріктеменің бірнеше көрінісін жинауға болады[31] немесе үлгіні айналдыру арқылы.[8] Бірнеше көрініске ие болу бір стекке қарағанда көбірек ақпарат береді; мысалы, үлгінің кейбір бөліктерінің окклюзиясын жеңуге болады. Сондай-ақ, бірнеше көріністер төменде сипатталғандай нашар осьтік ажыратымдылықты жеңе отырып, кескіннің 3D ажыратымдылығын жақсартады.

Сондай-ақ, кейбір зерттеулер SPIM-ді үлгінің тек бір кесіндісін бейнелеу үшін қолданады, бірақ уақытша ажыратымдылығы анағұрлым жоғары. Бұл мысалы. нақты уақыт режимінде зебра балық эмбрионының соғып тұрған жүрегін бақылау.[32] Үлгіге жылдам аударма кезеңдерімен бірге жылдамдықты 3D бөлшектерін қадағалау жүзеге асырылды.[33]

Ажыратымдылық күші

SPIM-нің бүйірлік ажыратымдылығы стандартты (epi) флуоресценттік микроскоппен салыстыруға болады, өйткені ол анықтау мақсатымен және анықталған жарықтың толқын ұзындығымен толық анықталады (қараңыз) Abbe limit ). Мысалы. жасыл спектрлік аймақта 525 нм шамасында анықтау үшін 250-500 нм ажыратымдылыққа қол жеткізуге болады.[7] Осьтік ажыратымдылық бүйірден гөрі нашар (шамамен 4 есе), бірақ оны жұқа жарық парағын қолдану арқылы жақсартуға болады, бұл жағдайда изотропты ажыратымдылық мүмкін.[19] Жіңішке жеңіл парақтар тек шағын аймақта жұқа болады (үшін Гаусс сәулелері ) немесе басқадай мамандандырылған сәулелік профильдер, мысалы, Бессель сәулелері қолданылуы керек (қосымша күрделіліктен басқа, мұндай схемалар зиянды болуы мүмкін бүйірлік бөренелерді қосады)[13]). Сонымен қатар, изотропты ажыратымдылыққа әр түрлі бұрыштарда бір үлгіден алынған 3D кескін стектерін есептеу арқылы біріктіру арқылы қол жеткізуге болады. Содан кейін бір стекте жоқ тереңдіктің ажыратымдылығы туралы ақпарат екінші стектен жеткізіледі; мысалы, екі ортогоналды стектерде бір қабаттағы (нашар ажыратымдылық) осьтік бағыт екінші қабаттағы (жоғары ажыратымдылықты) бүйірлік бағыт болып табылады.

LSFM-нің бүйірлік ажыратымдылығын пайдалану арқылы Abbe шегінен тыс жақсартуға болады супер ажыратымдылықтағы микроскопия техникалар, мысалы. бір фторофорды қолданылған оптикалық жүйенің номиналды ажыратымдылығынан гөрі кеңістіктік дәлдікпен анағұрлым жоғары орналастыруға болатындығын ескере отырып (қараңыз) микроскопиялық локализацияның стохастикалық әдістері ).[22] Сондай-ақ жарықтандырудың құрылымдық әдістері LSFM секцияларының оптикалық қабілетін одан әрі жақсарту үшін қолданылды.[23]

Жолақ артефактілері

Жоғарғы жағы: LSFM ішіндегі жолақ артефактілер. Төменде: айналдыру арқылы жолақты артефактілерді азайту

Әдетте жарықтандыру үлгіні бір жағынан еніп жатқанда, жарық парағында тұрған кедергілер оның сапасына шашырау және / немесе сіңіру арқылы кедергі келтіруі мүмкін. Әдетте бұл кескіндердегі қараңғы және жарқын жолақтарға әкеледі. Егер сынамалардың бөліктері сыну көрсеткішінен едәуір жоғары болса (мысалы, жасушалардағы липидті көпіршіктер), олар сонымен қатар фокустық әсерге әкелуі мүмкін, нәтижесінде бұл құрылымдардың артында жарқын жолақтар пайда болады. Бұл артефактіні жеңу үшін жарық парақтары мыс. «айналдыру». Бұл дегеніміз, жарық парағының түсу бағыты бірнеше градусқа (~ 10 °) жылдам өзгереді (~ 1 кГц жылдамдығы), сондықтан жарық кедергі аймақтарының артына түседі. Бұл артефактілерді одан әрі азайту үшін жарықтандыруды екі (бұрылған) жарықшақтармен (жоғарыдан қараңыз) жүргізуге болады.[8]Сонымен қатар, VSNR (Variational Stasionary Noise Remover) деп аталатын алгоритм жасалды және ол тегін Фиджи плагині ретінде қол жетімді. [34]

Тарих

20 ғасырдың басында, R. A. Zsigmondy таныстырды ультрамикроскоп қараңғы өрісті микроскопияға жарықтандырудың жаңа схемасы ретінде. Мұнда күн сәулесі немесе ақ шам жарық дәлдігін кесу үшін қолданылады. Содан кейін жарықшақты конденсатор линзасы арқылы үлгіні жарықтандырады. Шашырау (суб-дифрактивті) бөлшектерді микроскоппен перпендикуляр түрде байқауға болады. Бұл қондырғы өлшемдері микроскоптың ажыратымдылығынан кіші бөлшектерді байқауға мүмкіндік берді және 1925 жылы Зсигмондиге Нобель сыйлығын берді.[35]

Флуоресценттік микроскопия үшін осы жарықтандыру сызбасының алғашқы қолданылуы 1993 жылы жарық көрді Voie және басқалар. ортогональды-жазықтықты флуоресценциялы оптикалық кесінді (OPFOS) атымен.[4] ішкі құрылымын бейнелеу үшін коклеа. Ол кездегі ажыратымдылық 10 мкм бойлыққа және 26 мк ұзына бойына шектелген, бірақ миллиметр диапазонындағы үлгінің өлшемінде. OPFOS микроскопы жарықтандыру үшін қарапайым цилиндрлік линзаны қолданды. SPIM-ді одан әрі дамыту және жетілдіру 2004 жылдан басталды.[5] Осы жарияланымнан кейін Хуйскен және басқалар. әдістеме кең қолданыста болды және қазіргі кезде де өлшеудің жаңа жағдайларына бейімделген (жоғарыдан қараңыз). 2010 жылдан бастап флуоресценция қоздырғышымен және шектеулі ажыратымдылығымен алғашқы ультрамикроскоп[36] және 2012 жылдан бастап бірінші SPIM коммерциялық қол жетімді.[37] SPIM-ді дамыту туралы жақсы шолу рефератта келтірілген.[38] 2012 жыл ішінде ашық ақпарат көзі LSFM құрылыстарының толық жоспарларын және қажетті бағдарламалық жасақтаманы еркін жариялайтын жобалар пайда бола бастады.[39][40][41][42]

Қолданбалар

SPIM / LSFM көбінесе даму биологиясында қолданылады, мұнда эмбрионның дамуын ұзақ (бірнеше күн) бақылауға мүмкіндік береді (тіпті ағаштарды толықтай қалпына келтіргенде де).[5][43] SPIM-ді техникамен біріктіруге болады флуоресценттік корреляциялық спектроскопия флуоресцентті бөлшектердің кеңістіктік шешілген қозғалғыштығын өлшеуге мүмкіндік беру (мысалы, флуоресцентті моншақ, кванттық нүктелер немесе флуоресцентті ақуыздар) тірі биологиялық үлгілердің ішіндегі.[19][20]

Ми немесе бүйрек сияқты қатты шашырайтын биологиялық тіндерді SPIM-ге түсірмес бұрын химиялық жолмен бекітіп, тазарту керек.[44] Ол үшін тіндерді тазартудың арнайы әдістері әзірленген, мысалы. 3DISCO, КУБИК және АЙҚЫНДЫҚ. Байланысты сыну көрсеткіші сәйкес тазартылған үлгіден батыру сұйықтықтары және бейнелеу кезінде қалааралық арнайы мақсаттар қолданылуы керек.

  • H2B-HcRed экспрессиясын білдіретін тірі сфероидты SPIM-бейнелеу. Әр үш минут сайын тілімдер аралығы 1 мкм 100 кесіндіден тұратын Z-стектер тіркелді (10 × объективті, NA = 0,3). Z-стектерінің максималды проекциясы әр уақыт нүктесі үшін көрсетілген.[45]

  • EzDSLM көмегімен алынған DiI-таңбаланған амебалардың еркін қозғалатын суреттері.[46]

  • HeLa жасушалары тетрамерлерін білдіретін жасыл флуоресцентті ақуыз. Сол жақта трансмиссиялық жарықтандыру кескіні, ал оң жақта LSFM кескіні көрсетілген. Көлеңкелер сияқты типтік SPIM артефактілері айқын көрінеді. Жарық парағы төменнен жоғары бағытталды.

  • Жоғарыдағы суреттегі z-стектің көлемдік қайта құруы.

  • Тінтуірдің миы (Thy-1 GFP-M) көмегімен тазартылды 3DISCO әдісі және жарық парағының микроскопиясы арқылы бейнеленген.

Әдебиеттер тізімі

  1. ^ Фадеро, ТК .; т.б. (2018). «LITE микроскопиясы: модельді ағзалардың көлбеу ақшыл қоздырғышы жоғары ажыратымдылық пен фототазартуды ұсынады». Жасуша биологиясының журналы. 217 (5): 1869–1882. дои:10.1083 / jcb.201710087. PMC  5940309. PMID  29490939.
  2. ^ Келлер, Филипп Дж.; Stelzer, Ernst H. K. (2006). «Lichtscheiben-Mikroskopie in der molekularen Zellbiophysik» (PDF). Лейборвельт. 7 (5): 18–21.
  3. ^ Томер, Раджу; Ловетт-Баррон, Мэттью; Каувар, Ысқақ; Андалман, Аарон; Бернс, Ванесса М .; Санкаран, Сетураман; Гросеник, Логан; Брокстон, Майкл; Янг, Самуил; Дейзерот, Карл (2015). «SPED жарық парағының микроскопиясы: биологиялық жүйенің құрылымы мен қызметін жылдам картаға түсіру». Ұяшық. 163 (7): 1796–1806. дои:10.1016 / j.cell.2015.11.061. ISSN  0092-8674. PMC  4775738. PMID  26687363.
  4. ^ а б A. H. Voie; Бернс Д. Ф.А.Спельман (1993 ж. Маусым). «Ортогональды-жазықтықтағы флуоресценциялы оптикалық кесінді: макроскопиялық биологиялық үлгілерді үш өлшемді бейнелеу». Микроскопия журналы. 170 (3): 229–236. дои:10.1111 / j.1365-2818.1993.tb03346.x. ISSN  0022-2720. PMID  8371260. S2CID  2901024.
  5. ^ а б c Хискен Дж .; Свогер Дж .; Дель Бене, Ф .; Виттбродт, Дж .; Stelzer, E. H. (2004). «Тікелей эмбриондардың ішіндегі оптикалық кесіндімен жазықтықты жарықтандыруды микроскопиялық әдіспен кесу». Ғылым. 305 (5686): 1007–1009. Бибкод:2004Sci ... 305.1007H. CiteSeerX  10.1.1.456.2250. дои:10.1126 / ғылым.1100035. PMID  15310904. S2CID  3213175.
  6. ^ Тимо карталары; Норберт Джер; Андреа Чаки; Надин Фоглер; Юрген Попп; Вольфганг Фрицше (2012 ж. 5 қараша). «1912 ж. Иммерсиялық ультрамикроскопияның өнертабысы-нанотехнологияның тууы?». Angewandte Chemie International Edition. 51 (45): 11208–11212. дои:10.1002 / anie.201204688. ISSN  1433-7851. PMID  23065955.
  7. ^ а б Грегер, К; Свогер, Дж; Stelzer, EH (ақпан 2007). «Флуоресцентті бір жазықтықты жарықтандыру микроскопының негізгі құрылымдық бөліктері және қасиеттері». Ғылыми инструмент. 78 (2): 023705–023705–7. Бибкод:2007RScI ... 78b3705G. дои:10.1063/1.2428277. PMID  17578115.
  8. ^ а б c Хискен, Ян; Штайнер, Дидье Ю.Р (2007). «Тіпті көп бағытты таңдаулы жазықтық жарықтандыру микроскопиясы арқылы флуоресценцияны қоздыру (mSPIM)». Оптика хаттары. 32 (17): 2608–10. Бибкод:2007 жыл ... 32.2608H. дои:10.1364 / OL.32.002608. ISSN  0146-9592. PMID  17767321. S2CID  15231468.(жазылу қажет)
  9. ^ Томер, Раджу; Хайри, Халед; Амат, Фернандо; Келлер, Филипп Дж (3 маусым 2012). «Бір мезгілде мультипликациялық мультипликациялық мультипликациямен дамып келе жатқан эмбриондардың сандық жоғары жылдамдығы». Табиғат әдістері. 9 (7): 755–763. дои:10.1038 / nmeth.2062. ISSN  1548-7091. PMID  22660741. S2CID  14191130.(жазылу қажет)
  10. ^ Крчич, Урос; Гюнтер, Стефан; Сондерс, Тимоти Э; Стрейхан, Себастьян Дж; Хуфнагель, Ларс (3 маусым 2012). «Тото кескінді жылдам түсіруге арналған мультипликативті жарық парақты микроскоп». Табиғат әдістері. 9 (7): 730–733. дои:10.1038 / nmeth.2064. ISSN  1548-7091. PMID  22660739. S2CID  13388657.(жазылу қажет)
  11. ^ Келлер, П.Ж .; Шмидт, А.Д .; Виттбродт, Дж .; Стельцер, Е.Х.К. (14 қараша 2008). «Зебрафиштің эмбриондық дамуын сканерленген жарық парағының микроскопиясы арқылы қалпына келтіру» (PDF). Ғылым. 322 (5904): 1065–1069. Бибкод:2008Sci ... 322.1065K. дои:10.1126 / ғылым.1162493. ISSN  0036-8075. PMID  18845710. S2CID  7594561.
  12. ^ Фарбах, Ф. О .; Рорбах, А. (қараша, 2010). «Өздігінен қалпына келетін фазалық пішінді сәулелермен сызылған сканерленген ақ парақты микроскоп». Optics Express. 18 (23): 24229–24244. Бибкод:2010OExpr..1824229F. дои:10.1364 / oe.18.024229. PMID  21164769.
  13. ^ а б Планчон, Т.А .; Гао, Л .; Милки, Д. Е .; Дэвидсон, М. В .; Гэлбрейт, Дж. А .; Гэлбрейт, Дж .; Бетциг, Э. (2011). «Тірі жасушаларды үш өлшемді жылдам изотропты бейнелеу Бессель сәулесінің жазықтық сәулеленуін қолдану». Табиғат әдістері. 8 (5): 417–423. дои:10.1038 / nmeth.1586. PMC  3626440. PMID  21378978.
  14. ^ Веттенбург, Том; Дальгарно, Хизер I С; Нилк, Джонатан; Колл-Лладо, Клара; Ферриер, Дэвид Е К; Žižmár, Tomáš; Ганн-Мур, Фрэнк Дж; Долакия, Кишан (2014). «Жеңіл парақты микроскопия» (PDF). Табиғат әдістері. 11 (5): 541–544. дои:10.1038 / nmeth.2922. hdl:10023/5521. PMID  24705473. S2CID  205422713.
  15. ^ Нилк, Джонатан; Макклуски, Калей; Прекиадо, Мигель А .; Мазилу, Майкл; Ян, Чжэньи; Ганн-Мур, Фрэнк Дж .; Аггарвал, Саня; Телло, Хавьер А .; Ferrier, David E. K. (1 сәуір 2018). «Жеңілістен компенсацияланған көбейту-инвариантты сәулелермен жарық парақты микроскопия». Ғылым жетістіктері. 4 (4): eaar4817. arXiv:1708.02612. Бибкод:2018SciA .... 4.4817N. дои:10.1126 / sciadv.aar4817. PMC  5938225. PMID  29740614.
  16. ^ Dunsby, C. (2008). «Қиғаш жазықтықтағы микроскопия арқылы оптикалық кесіндімен кескіндеме». Optics Express. 16 (25): 20306–16. Бибкод:2008OExpr..1620306D. дои:10.1364 / OE.16.020306. hdl:10044/1/53595. ISSN  1094-4087. PMID  19065169.
  17. ^ Зено Лавагнино; Франческа Селла Заначки; Эмилиано Ронзитти; Альберто Диаспро (2013). «Екі-фотонды қоздырғыштың жоғары шашыранды үлгілердің жазықтық жарықтандырғыш таңдамалы микроскопиясы (2PE-SPIM): сипаттамасы және қолданылуы». Optics Express. 21 (5): 5998–6008. Бибкод:2013OExpr..21.5998L. дои:10.1364 / OE.21.005998. ISSN  1094-4087. PMID  23482168.
  18. ^ Қасқыр S, Supatto W, Debregeas G, Mahou P, Kruglik SG, Sintes J, Beaurepaire E, Candelier R (мамыр 2015). «Екі фотонды жарық парағының микроскопиясымен бүкіл мидың функционалды бейнесі». Хат алмасу. Табиғат әдістері. 12 (5): 379–80. дои:10.1038 / nmeth.3371. PMID  25924070. S2CID  19746295.
  19. ^ а б c г. Капулад Дж .; Вахсмут, М .; Хуфнагель, Л .; Кноп, М. (2011). «Белоктың диффузиясының сандық флуоресценттік бейнесі және тірі жасушалардағы өзара әрекеттесу». Табиғи биотехнология. 29 (9): 835–839. дои:10.1038 / nbt.1928. PMID  21822256. S2CID  10493584.
  20. ^ а б c Волланд, Т .; Ши, Х .; Санкаран, Дж .; Stelzer, E. H. (мамыр 2010). «Біртекті емес үш өлшемді орталардың жарықтандырғыш флуоресцентті корреляциялық спектроскопиясы (SPIM-FCS) зондтары». Optics Express. 18 (10): 10627–10641. Бибкод:2010OExpr..1810627W. дои:10.1364 / oe.18.010627. PMID  20588915.
  21. ^ Клаус Грегер; Мануэл Дж. Нетц; Рейно Эммануэль; Эрнст Х.К. Stelzer (2011). «Бір өлшемді флюоресценттік өмірді бір жазықтықта жарық беретін микроскоппен бейнелеу шудың арақатынасына жақсартылған сигнал береді». Optics Express. 19 (21): 20743–50. Бибкод:2011OExpr..1920743G. дои:10.1364 / OE.19.020743. ISSN  1094-4087. PMID  21997084.
  22. ^ а б Франческа Селла Заначки; Зено Лавагнино; Мишела Перроне Доннорсо; Alessio Del Bue; Лаура Фуриа; Марио Фаретта; Альберто Диаспро (9 қазан 2011). «Қалың биологиялық үлгілердегі тірі жасушалы 3D супер ажыратымдылықтағы бейнелеу». Табиғат әдістері. 8 (12): 1047–1049. дои:10.1038 / nmeth.1744. ISSN  1548-7091. PMID  21983925. S2CID  205420075.
  23. ^ а б Джером Мерц; Джинхён Ким (2010). «HiLo фонынан бас тарту арқылы бүкіл тышқанның миында ақшыл парақты микроскопияны сканерлеу». Биомедициналық оптика журналы. 15 (1): 016027–016027–7. Бибкод:2010JBO .... 15a6027M. дои:10.1117/1.3324890. ISSN  1083-3668. PMC  2917465. PMID  20210471.
  24. ^ Фридрих, Майк; Ган, Цян; Ермолаев, Владимир; Harms, Григорий С. (2011). «STED-SPIM: Эмиссиялық ынталандыру сарқылуы парақтың жарықтандырылуының микроскопиялық шешімін жақсартады». Биофизикалық журнал. 100 (8): L43-5. Бибкод:2011BpJ ... 100L..43F. дои:10.1016 / j.bpj.2010.12.3748. PMC  3077687. PMID  21504720..
  25. ^ Fadero TC және т.б. 2017. «LITE микроскопиясы: жоғары сандық апертура, флуоресценттік фотосурет түсірудің төмен әдістемесі» bioRxiv doi: https://doi.org/10.1101/181644 https://www.biorxiv.org/content/early/2017/10/04/181644.1
  26. ^ Джоранд Р және т.б. 2012. «Қалың біртекті емес үлгілерді терең және айқын оптикалық бейнелеу» PLOS one doi:https://doi.org/10.1371/journal.pone.0035795
  27. ^ Jorand R, 2013. «SPIM pour l'imagerie 3D des sphéroïdes микроскопының декорациясы және сәулеленуінің амелиорациясы» theses.fr https://www.theses.fr/180545140
  28. ^ Алексис Майзель, Даниэл фон Вангенхайм, Ферн н Федериси, Джим Хаселофф, Эрнст Х.К. Stelzer (қазан 2011). «Флуоресцентті жарық парағының микроскопиясын қолдана отырып, физиологиялық жарық жағдайында өсімдіктердің өсуін жоғары ажыратымдылықта тірі бейнелеу». Зауыт журналы. 68 (2): 377–385. дои:10.1111 / j.1365-313X.2011.04692.x. ISSN  0960-7412. PMID  21711399.CS1 maint: бірнеше есімдер: авторлар тізімі (сілтеме)
  29. ^ Терренс Ф. Холекамп; Диуакар Турага; Тимоти Э. Қасиетті (13 наурыз 2008). «Нейрондық популяциялардағы белсенділікті үш өлшемді флуоресценттік бейнелеу объективті-жалпақ жазықтық жарықтандыру микроскопиясы арқылы». Нейрон. 57 (5): 661–672. дои:10.1016 / j.neuron.2008.01.011. ISSN  0896-6273. PMID  18341987. S2CID  9571663.
  30. ^ Ю.Ву; А.Гитани; Р.Кристенсен; А.Сантелла; З. Ду; Г.Рондо; З.Бао; Д. Колон-Рамос; Х.Шрофф (2011 ж., 25 қазан). «Іріктелген жазықтықты жарықтандыратын микроскопия (iSPIM)» канорабдит элегандарындағы жасуша идентификациясы мен нейро-дамуды бейнелеуге мүмкіндік береді «. Ұлттық ғылым академиясының материалдары. 108 (43): 17708–17713. Бибкод:2011PNAS..10817708W. дои:10.1073 / pnas.1108494108. ISSN  0027-8424. PMC  3203761. PMID  22006307.
  31. ^ а б c Ву, Йиконг; Ваврзусин, Петр; Сенсеней, Джастин; Фишер, Роберт С; Кристенсен, Райан; Сантелла, Энтони; Йорк, Эндрю Дж; Қыс, Питер В; Уотерман, Клар М; Бао, Жиронг; Колон-Рамос, Даниэль А; Маколифф, Мэттью; Шроф, Хари (2013). «Екі жақты көрінетін жазықтық жарықтандыру микроскопиясымен кеңістіктік изотропты төртөлшемді бейнелеу». Табиғи биотехнология. 31 (11): 1032–1038. дои:10.1038 / nbt.2713. ISSN  1087-0156. PMC  4105320. PMID  24108093.
  32. ^ «Huisken зертханасы». Архивтелген түпнұсқа 2014 жылғы 7 шілдеде.
  33. ^ Йорг Риттер; Роман Вейт; Ян-Питер Зибрас; Ульрих Крибичек (2008), «Фокустық жазықтықты селективті микроскопия әдісімен контрастты бір бөлшекті бақылау», Optics Express, 16 (10), 7142-52 бб, Бибкод:2008OExpr..16.7142R, дои:10.1364 / OE.16.007142, ISSN  1094-4087, PMID  18545417
  34. ^ Джером Ференбах; Пьер Вайс; Корин Лоренцо (2012). «Стационарлық шуды жоюдың вариациялық алгоритмдері: бейнелеудің микроскопияға қосымшалары» (PDF). IEEE кескінді өңдеу бойынша транзакциялар. 21 (10): 4420–4430. Бибкод:2012ITIP ... 21.4420F. дои:10.1109 / TIP.2012.2206037. ISSN  1057-7149. PMID  22752131. S2CID  6828193.
  35. ^ Р. Зсигмондидің Нобель дәрісі: Коллоидтардың қасиеттері (ультрамикроскоптың қысқаша түсініктемесін қоса)
  36. ^ LaVision Biotech пресс-релизі Мұрағатталды 24 желтоқсан 2013 ж Wayback Machine (қол жеткізілген 2012-11-04)
  37. ^ Lightsheet Z.1 Light Sheet микроскоп жүйесі туралы Carl Zeiss пресс-релизі (қол жеткізілген 2012-11-15)
  38. ^ P. A. Santi (1 ақпан 2011). «Жеңіл парақтың флуоресценттік микроскопиясы: шолу». Гистохимия және цитохимия журналы. 59 (2): 129–138. дои:10.1369/0022155410394857. ISSN  0022-1554. PMC  3201139. PMID  21339178.
  39. ^ OpenSPIM жобасының веб-парағы (қол жеткізілген 2013-06-08)
  40. ^ Питер Дж Питроне; Йоханнес Шинделин; Люк Стювенберг; Стефан Прейбиш; Майкл Вебер; Кевин В Элисейри; Ян Хискен; Павел Томанкак (9 маусым 2013). «OpenSPIM: ашық парақты микроскопия платформасы». Табиғат әдістері. 10 (7): 598–9. arXiv:1302.1987. дои:10.1038 / nmeth.2507. ISSN  1548-7091. PMC  7450513. PMID  23749304.
  41. ^ OpenSPIN жобасының веб-парағы (қол жеткізілген 2013-06-08)
  42. ^ Эмилио Дж Гуалда, Тиаго Вале, Педро Альмада, Джос А Фейдж, Габриэль Мартинс, Нуно Морено (9 маусым 2013). «OpenSpinMicroscopy: ашық көзді интеграцияланған микроскопия платформасы». Табиғат әдістері. 10 (7): 599–600. дои:10.1038 / nmeth.2508. ISSN  1548-7091. PMID  23749300. S2CID  27935584.CS1 maint: бірнеше есімдер: авторлар тізімі (сілтеме)
  43. ^ Вервир, П.Ж .; Свогер Дж .; Пампалони, Ф .; Грегер, К .; Марчелло, М .; Stelzer, E. H. (2007). «Жеңіл параққа негізделген микроскопиямен үлкен үлгілерді жоғары ажыратымдылықты үш өлшемді бейнелеу». Табиғат әдістері. 4 (4): 311–313. дои:10.1038 / nmeth1017. PMID  17339847. S2CID  12440781.
  44. ^ Джерлинг, Нина; Беккер, Клаус; Вегенаст-Браун, Беттина М .; Grathwohl, Стефан А .; Джакер, Матиас; Додт, Ханс-Ульрих (27 мамыр 2015). Виторика, Хавьер (ред.) «Ультрамикроскопия әдісімен зерттелген тышқандардағы ми-амилоидоз». PLOS ONE. 10 (5): e0125418. Бибкод:2015PLoSO..1025418J. дои:10.1371 / journal.pone.0125418. ISSN  1932-6203. PMC  4446269. PMID  26017149.
  45. ^ Корин Лоренцо; Селин Фронгия; Рафаэль Джоранд; Джером Ференбах; Пьер Вайс; Амина Мандхуй; Гийом Гей; Бернард Дюкомун; Валери Лобжуа (2011). «Жеңіл парақты микроскопияны қолдана отырып, 3D сфероидты ісік модельдеріндегі жасушалардың бөліну динамикасын бақылау». Ұяшық бөлімі. 6 (1): 22. дои:10.1186/1747-1028-6-22. ISSN  1747-1028. PMC  3274476. PMID  22152157.
  46. ^ Дайсуке Такао; Атсуши Танигучи; Такааки Такеда; Сейджи Сонобе; Шигенори Нонака; Александр Дж. Кабла (2012 ж. 5 желтоқсан), «Жарық парағының микроскопиясын қолданып, амебоидтық қозғалыстарды жылдам бейнелеу», PLOS ONE, 7 (12), б. e50846, Бибкод:2012PLoSO ... 750846T, дои:10.1371 / journal.pone.0050846, ISSN  1932-6203, PMC  3515486, PMID  23227214

Әрі қарай оқу

Сыртқы сілтемелер