Транскрипция - Run-off transcription

A транскрипция талдау - бұл талдау молекулалық биология өткізіледі in vitro нақты промотордың транскрипциясын бастау учаскесінің (1 негізгі жұп жоғары) орналасуын дәлдігі мен жылдамдығымен бірге анықтау in vitro транскрипция.[1][2][3]

Транскрипцияны іске қосу транскрипция деңгейлеріне промотор аймақтарының әсерін сандық түрде өлшеу үшін қолданыла алады,[1][2][4] Экстракорпоралды болғандықтан, бұл талдау жасушаға тән геннің транскрипция жылдамдығын дәл болжай алмайды, мысалы, in vivo талдауларынан, мысалы, ядролық іске қосу.[1][2]

Транскрипциялық талдауды жүргізу үшін қызығушылық генін, соның ішінде промоутер, а-ға клондалған плазмида[4]. Плазмида белгілі болған кезде қорытылады рестрикциялық фермент транскрипцияны бастау учаскесінен төменде күтілгендей етіп кесіп тастаңыз мРНҚ ағып кететін өнімді оңай бөлуге болады гель электрофорезі.[1][2][4]Осы талдауды жүргізбес бұрын ДНҚ жоғары дәрежеде тазалануы керек.[1] [2] Транскрипцияны бастау үшін, радиобелгіленген UTP, басқа нуклеотидтер, және РНҚ-полимераза сызықтық ДНҚ-ға қосылады.[1][2] Транскрипция РНҚ-полимераза ДНҚ соңына жеткенше жалғасады, ол жерде жай ДНҚ шаблоны «ағып кетеді», нәтижесінде анықталған ұзындықтағы мРНҚ фрагменті пайда болады.[1][2] Содан кейін бұл фрагментті гельді электрофорез әдісімен бөлуге болады, өлшемдер стандарттарымен қатар, және авториадиография.[1][2][4] Жолақтың сәйкес өлшемі рРНҚ мөлшерін рестриктациялық ферменттің кесілген жерінен транскрипцияның басталу орнына (+1) көрсетеді.[4] Жолақтың қарқындылығы өндірілген мРНҚ мөлшерін көрсетеді.[4]

Сонымен қатар, оны транскрипцияның белгілі бір жағдайларда (яғни, әр түрлі химиялық заттардың қатысуымен) жүзеге асырылатынын немесе жасалмайтынын анықтау үшін пайдалануға болады.[5]


Әдебиеттер тізімі

  1. ^ а б c г. e f ж сағ Левенштейн, П.М .; Song, C. Z .; Жасыл, М (2007). «Вирустық протеиндік домендердің реттеуші функцияларын тексеру үшін in vitro транскрипциясын қолдану». Молекулалық медицинадағы әдістер. 131: 15–31. PMID  17656772.
  2. ^ а б c г. e f ж сағ «Транскрипция». Молекулалық станция. Архивтелген түпнұсқа 2014 жылдың 22 сәуірінде. Алынған 16 сәуір, 2014.
  3. ^ Леланда, С; Гутиерес, С; Матье, С; Ведель, Ф; Remacle, C; Марехал-Друар, Л; Бреннике, А; Биндэр, S; Четрит, П (1996). «Ағынды транскрипцияда белсенді промотор элементі никотиана силвестрис митохондриясындағы над және рпс гендерінің екі цистронының экспрессиясын басқарады». Нуклеин қышқылдарын зерттеу. 24 (23): 4798–804. дои:10.1093 / нар / 24.23.4798. PMC  146301. PMID  8972868.
  4. ^ а б c г. e f Эллисон, Лизабет. «Іргелі молекулалық биология, 11 тарау» (PDF). BlackWell Publishing. Алынған 18 сәуір, 2014.
  5. ^ Санчес, Альваро; Осборн, Мелиса Л.; Фридман, Ларри Дж.; Кондев, Джейн; Геллес, Джефф (2011). «Бір молекулаларды талдау арқылы бактериялық промотордағы транскрипциялық репрессия механизмі». EMBO журналы. 30 (19): 3940–3946. дои:10.1038 / emboj.2011.273. PMC  3209775. PMID  21829165.