Микротехника - Microtechnique

Микротехника микро объектілерді оқуға дайындау үшін қолданылатын әдістердің жиынтығы.[1] Қазіргі уақытта ол өміртану ғылымында көптеген салаларда жұмыс істейді. Микротехниканың екі танымал тармағы - ботаникалық (өсімдік) микротехника және зоологиялық (жануарлар) микротехника.

Өсімдіктер микротехникасына да, жануарлардың микротехникасына қатысты да, соңғы микро эксперименттерде төрт типтегі әдістер қолданылады, олар тұтас тіреуіштер, жағындылар, асқабақтар және кесінділер.[2] Өсімдіктің микротехникасы тікелей макроскопиялық зерттеулерді, еркін бөлімдерді, клирингті, мацерацияны, кірістіруді және бояуды қамтиды.[3] Зоологиялық микро бақылауларда қолданылатын үш дайындық әдісі парафин әдіс, целлоидин әдісі және мұздату әдісі.[4]

Тарих

Ботаникадағы микротехниканың ерте дамуы зоологиямен тығыз байланысты. Зоологиялық және ботаникалық жаңалықтарды зоологтар да, ботаниктер де қабылдайды.[5]

Микротехника өрісі 1930 жылдардың аяғында құрғақ дайындау принципі пайда болғаннан бастап жалғасты.[6] Ботаникадағы микротехниканың ерте дамуы зоологиямен тығыз байланысты. Зоологиялық және ботаникалық жаңалықтарды зоологтар да, ботаниктер де қабылдайды.[5] Бастап Гук ашылған жасушалар, микротехника ерте микроскоптардың пайда болуымен де дамыды. Микротехника содан кейін 1800-1875 жылдар аралығында дамыды.[6] 1875 жылдан кейін заманауи микро әдістер пайда болды. Соңғы жылдары дәстүрлі әдістер де, заманауи микротехника да көптеген тәжірибелерде қолданылуда.[3]

Жалпы қолданылатын әдістер

Кейбір жалпы микротехниканы өсімдіктерде де, жануарларда да микро бақылау кезінде қолдануға болады. Өсімдіктер мен жануарлардың үлгілерін белгілі бір мақсаттарға дайындау кезінде тұтас монтаждар, жағындылар, сквоштар мен бөлімдер жиі қолданылатын төрт әдіс болып табылады.[2]

Тұтас тіреулер

Тұтас қондырғылар, әдетте, бақылаушыларға бүкіл ағзаны пайдалану немесе белгілі бір орган құрылымы туралы егжей-тегжейлі зерттеулер жүргізу қажет болған кезде қолданылады.[7] Бұл әдіс тұқымдар мен микро қазба тәрізді ылғалды кетіруге болатын заттарды қажет етеді.[2]

Әр түрлі мақсаттарға сәйкес Тұтас тіреуіштерді үш категорияға бөлуге болады: Уақытша тұтас тіреулер, Жартылай тұрақты тұтас тіреулер және тұрақты тұтас тіреулер. Уақытша тұтас тіреулер, әдетте, сабақ барысында сабақ беру үшін қолданылады.[8] Жартылай тұрақты тұтас тіреуіштер он төрт күннен аспайтын уақытты пайдалануға дайындалған. Бұл дайындықта Канада бальзамы үлгілерді жабу үшін қолданылады, ал бұл әдіс бір клеткалы және колониялық балдырларды, саңырауқұлақ спораларын, мүк протонематаларын және прототалилерді бақылау үшін қолданылады. Үшінші жол - бұл тұрақты тұтас тіреу.[8] Әдетте екі әдіс қолданылады, олар гигробутол әдісі және глицерин -ксилол әдіс.[9]

Қатты және сұйық ортадан жағынды

Жағындылар

Smears - тілімдерді дайындаудың қарапайым тәсілі. Бұл әдіс көптеген зертханаларда қолданылады.[10] Сұйық немесе жартылай сұйық материалдарды тарату арқылы слайд үлгілерін жасау кезінде немесе жағындыда жануарлар мен өсімдіктердің тіндері мен жасушаларын жоғалту кезінде жағындыларды қолдануға болады.[10] Жағылу әдісін қолданудың қадамдары мен талаптары келесідей: біріншіден, жағынды. Қатты материал жағылған кезде материалды әйнек сырғымасына қойып, сүрту керек, содан кейін материалды бір жағына басу үшін пышақты қолданыңыз.[11] Ұяшықтарды басып шығарып, әйнек слайдына жұқа қабатта біркелкі үлестіру керек, мысалы, тозаң жағылған.[10]

Асқабақтар

Сквош - бұл заттар, оларды күшпен езу. Бұл әдіс мөлдір және нәзік маталарды дайындауға жарамды.[12] Сквош слайдтарын дайындаған кезде олардың нысандары микроскоппен анық байқалуы үшін жұқа және мөлдір болады деп болжанған.[12]

Бұл әдіс материалды шыны слайдқа қойып, оны скальпельмен алып тастау немесе инені бөлшектеу, содан кейін бір тамшы бояғыш ерітіндісін қосу болып табылады.[2] Осы қадамдардан кейін екінші слайдты бастапқы слайдты жабу үшін қолданыңыз және материалды бұзу және ұяшықтарды тарату үшін біркелкі қысым жасаңыз.[12] Сонымен қатар, слайдтарды дайындаудың тағы бір мүмкін әдісін қолдануға болады. Үлгілерді қақпақ сырғымасы мен сырғыманың арасында бірдей қысыммен шығаруға болады.[12]

Бөлімдер

Негізгі мақала: Гистология

Бөлімдер жасушалық құрылымдардың барлық зерттеулерінде жұқа тілімдерді тексеру қажет болғандықтан белгілі.[13] Бұл техниканы жануарлар мен өсімдіктер тінін дайындау үшін қолдануға болады.[14] Оптикалық микроскопияда қолдану үшін материалдың қалыңдығы 2-ден 25 микрометрге дейін болуы керек. Электрондық микроскопия кезінде бақылаулар кезінде қималар 20 нан 30 метрге дейін болуы керек.[2] Микротом жеткілікті жұқа тілімдерді кесу кезінде қолдануға болады. Егер объектілер қалыңдықтың қажеттілігін қанағаттандыра алмаса, материалды бөлуге дейін алкогольді қолданып сусыздандыру қажет.[12] Секциялаудың үш әдісі - еркін қиманың техникасы, парафин әдісі және целлоидин әдісі.

Өсімдіктің микро тәжірибесінде қолданылатын әдістер

Ботаникалық микротехника - бұл микро көрнекілікті қамтамасыз ететін әдістердің жиынтығы ген және гендік өнім бүкіл өсімдікте.[15] Өсімдік микротехникасы сонымен қатар құнды эксперименттік ақпарат беретін зерттеу болып табылады.[3] Өсімдік микротехникасы жүз жыл бұрын жасалған классикалық әдістерді және ботаникалық микро зерттеулердегі зерттеу көлемімізді және тереңдігімізді кеңейту үшін жасалған жаңа әдістерді қамтиды.[15] Дәстүрлі және жаңа микротехника эксперименттік зерттеулер үшін пайдалы, ал кейбіреулері әрі қарай зерттеуге айтарлықтай әсер етеді.[3] Өсімдіктердің үлгілерін дайындаудың әртүрлі әдістері қолданылады, соның ішінде тікелей макроскопиялық зерттеулер, еркін бөлімдер,[16] тазарту, мацерация, ендіру және бояу.

Тікелей микроскопиялық зерттеулер

Тікелей микро зерттеу - бұл микро заттарды бақылауға дайындалған қарапайым әдіс. Сондай-ақ, бұл әдіс үлгілердің бетінде көгерудің өсіп жатқанын байқауға пайдалы. Бұл микро эксперименттің алғашқы қадамы болуы мүмкін.[17]

Еркін бөлім

Еркін кесу дегеніміз - қолмен ұстайтын жаңа немесе бекітілген тәжірибелік материалдардың жұқа тілімдерін жасау әдісі жүзі.[18] Еркін кесу дегеніміз - жаңа пісірілген немесе бекітілген материалдарды (көбінесе лигиздену дәрежесі төмен өсімдіктерді) арнайы аспаптарсыз немесе арнайы химиялық реагенттерсіз жіңішке тілімге кесу әдісін айтады.[16]

Клиринг

Клиринг техникасы мөлдір слайдтарды цитоплазмалық құрамның бір бөлігін алып тастап, содан кейін тіндерді өңдеу үшін жоғары сынғыш реагенттерді қолдану арқылы қамтамасыз етеді.[2] Бұл әдіс бүкіл слайдтарды дайындауға жарамды. Клиринг - бұл алкогольді жоюға арналған клирингтік реагенттерді қолдану процедурасы және тіндерді мөлдір етеді.[19] Ксилол - ең танымал клирингтік агент.[20][21]

Масерация

Тіндердің масерациясы - бұл тіндердің құраушы жасушаларын бөлу процесі. Бұл әдіс бақылаушыларға бүкіл жасушаны үшінші өлшемді детальмен зерттеуге мүмкіндік береді.[8] Химиялық мацерация әдісі дегеніміз - химиялық процедуралар мүшелерді өңдеу үшін немесе тіндерді жұмсарту үшін жасушаларды еріту және әртүрлі жасушаларды анықтауға мүмкіндік береді.[8]

Тіндерді өңдеу - ендіру станциясы

Кірістіру

Негізгі мақала: Гистология

Кірістіру техникасы - секциялау процесін жүргізген кездегі орташа кезең.[22] Үлгілерді дайындау кезінде мата жұмсақ болғандықтан біркелкі тілімдер жасау қиын.[23] Сондықтан бүкіл ұлпаны қатайту үшін, тіліктеуді жеңілдету үшін белгілі бір затпен ұлпаны сіңіру керек. Бұл процесс ендіру деп аталады.[23] Тіндерді ендіру үшін қолданылатын зат микроскоптың санатына, микро томның санатына және тіндердің санатына байланысты таңдалатын орта болып табылады.[24] Балқу температурасы 56-дан 62 ℃-ға дейінгі парафинді балауыз әдетте ендіру үшін қолданылады.[25]

Тіндерді өңдеу - слайдтардағы тіндердің бөліктері автоматтандырылған бояғышта боялады

Бояу

Негізгі мақала: Гистология

Өсімдік тіндерінің біразы түске ие болғандықтан, өсімдік тіндерінің арасындағы хроматикалық айырмашылық аз болады, ботаникалық құрылымды ажырату қиынға соғады.[26] Материал, әдетте, орнатудан бұрын боялған. Бұл процесті боялу деп атайды, оны ботаникалық үлгілерді дайындауға болады, осылайша үлгінің бір бөлігін екінші түрінен түсі бойынша ажыратуға болады.[2] Микро слайдтарды бояғанда қышқыл бояғыштарды қолдануға болады, мысалы, бояғыш ядроларды және басқа жасушалық компоненттерді сілтімен бояғанда қышқыл бояғыштар қолданылады.[2] Бояу үшін матаны автоматты түрде бояуға мүмкіндік беретін бояу машинасы қолданылады.[27]

Жануарларды бақылау үшін қолданылатын микротехника

Зоологиялық микротехника - малды микроскопиялық бақылауға дайындау өнері. Көптеген микротехниканы өсімдіктерде де, жануарларда да жүргізуге болады. Әр түрлі салада жұмыс істеген кезде кейбір әдістер өзгеше болуы мүмкін. Зоологиялық микро бақылауларда қолданылатын үш дайындық әдісін парафин әдісі, целлоидин әдісі, мұздату әдісі және әртүрлі әдістер деп қорытындылауға болады.[4]

Парафинді балауыз

Парафин әдісі

Инфильтрация және ендіру

Бұл процесс әдетте инфильтрация, ендіру, бөлу, бөлу және өңдеу кезеңдерінен тұрады.[28] Одан кейін бастапқы саты, фиксация, келесі саты дегидратация болып табылады, ол алкогольді қолданып матадағы суды кетіреді.[29] Содан кейін матаны сіңіріп, балауызға батыруға болады. Тіндік үлгіні балауызға салғаннан кейін бірнеше жыл сақтай алады.[29] Парафинді балауыз, ол жұмсақ және түссіз, ең көп қолданылатын реагент болып табылады.[30]

Микротом-пышақ профилі

Бөлім

Тіндерді кесу үшін кескіш пышақ ретінде микро том пышағын немесе ұстараның жүзін қолдануға болады.[4]

Микро том пышағы секциялармен жұмыс істеу үшін қолданылады. 1/1000 микрометрден аз кесінділерді дайындау кезінде микро том пышағын қолдану қажет.[31] Мұндай пышақты қолданған кезде операторлар өте мұқият болуы керек. Бұл құрал кейде практикалық емес, сондықтан ұстараның жүзін жалпы жұмыс кезінде 9 микроннан жоғары бөліктерді дайындауға қолданады (1 микрон 1/1000 микрометрге тең).[31] Сонымен қатар, ұстараның жүзі 20 мкм-ден кем емес қалың кесінділер қажет болған кезде микро том пышаққа қарағанда жақсы жұмыс істейді.[4]

Жапсыру және өңдеу

Бөлінгеннен кейін дайындалған тілімдер слайдтарға жапсырылады. Haupt’s және Mayer’s жиі қолданылатын екі аффикатив бар.[32] Haupt’s affixative құрамында 100 ccs (текше сантиметр) тазартылған су, 1гм желатин, 2 гм фенол кристалдары, 15 cc глицерин бар. Mayer аффиксаторы 5 см жұмыртқа альбумынан, 50 см глицериннен, 1 гм натрий салицилатынан тұрады.[33] Парафин кесінділерін жапсырудың жалпы кезеңдерін 1. Қажетті слайдтарды тазалаңыз, 2. Тазартылған слайдтарды белгілеңіз, 3. Әр слайдқа аффикативті тастаңыз, 4. Басқа слайд қойыңыз, 5. Аффиксаторды жайыңыз, 6. Қалқымалы тастаңыз. орта, 7. Парафинді қажетті ұзындыққа бөліңіз, 8. Бөлімдерді ауыстырыңыз, 9. Толық емес жүзу пайда болса, қалқымалы ортаны көбірек қосыңыз, 10. Температураны көтеріңіз, 11. Бөлімді кептіріп, сырғымалар мен артық қалқымалы ортаны алыңыз, 12.[4]

Парафин секцияларының өңделуіне мыналар жатады: 1. Депарафиндеу, 2. Шарсыздандыру ерітіндісін кетіру, 3. Ылғалдандыру, 4. Бояу, 5. Сусыздандыру, 6. Аралсыздандыру және тазарту, 7. Қақпақ сырғымасын орнату.[4]

Целлоидин әдісі

Целлоидин техникасы - целлоидинге үлгіні салу процедурасы.[34] Бұл әдісті үлкен, қатты заттарды орналастыру үшін қолдануға болады.[35] Целлоидин - ас қорыту талшығы, ол тез тұтанғыш және ол ацетонда, қалампыр майында, сусыз спирт пен эфирдің қоспасында ериді.[36] Целлоидин сумен кездескен кезде ақ эмульсиялық лайланған сұйықтыққа айналады, сондықтан құрамында целлоидин бар құрғақ ыдысты қолдану қажет.[35]

Целлоидинді кесу әдісі тіндерді бекіту және дегидратациялау, содан кейін оны сусыз спирт-эфир қоспасымен өңдеу. Осы қадамнан кейін целлоидинмен ұлпаны сіңдіру, сіңдіру және кесу.[37] Сонымен қатар, бұл тілімдеу әдісі үлкен тіндерді кесіп тастай алады және оның жылуының арқасында тіндердің кішіреюіне жол бермейді. Алайда, бұл техникада кейбір кемшіліктер бар. Мысалы, тілімдерді өте жіңішке етіп кесуге болмайды (20 микроннан артық), ал целлоидинмен сіңдіру көп уақытты алады.[38]

Мұздату әдісі

Мұздату техникасы ең көп қолданылатын секция әдісі болып табылады.[39] Бұл әдіс сақтауға болады иммундық әр түрлі қызмет антигендер жақсы. Жаңа тіндерді де, бекітілген тіндерді де мұздатуға болады. Сонымен қатар, бұл жаңа немесе тұрақты өсімдік тіндерінің бөліктерін мұздату үшін қолданылатын әдіс.[40]

Мұздату процедурасы кезінде тіндердегі су мұз кристалдарын түзеді, бұл көбінесе антигеннің локализациясына әсер етеді.[39] Әдетте, мұз кристалдары аз болған кезде эффект аз болады, ал мұз кристалдары үлкен болған кезде тін құрылымына үлкен зақым келеді деп сенеді және жоғарыда аталған құбылыс ылғал компоненттері көп ұлпаларда болуы ықтимал.[41] Мұз кристалының мөлшері оның өсу жылдамдығына тура пропорционалды, ал ядро ​​жылдамдығына кері пропорционалды (түзілу жылдамдығы), яғни мұз кристалының түзілу саны неғұрлым көп болса, соғұрлым ол аз болады және оның әсер етуі неғұрлым елеулі құрылым.[42] Сондықтан мұз кристалдарының санын барынша азайту керек. Мұздату әдісі тіндерді тез кесуге және реагенттер қолданбай биопсия жасауға мүмкіндік береді. Бұл процедура мұз кристалл түрінде болған жағдайда тез болуы керек.[41]

Сондай-ақ қараңыз

Әдебиеттер тізімі

  1. ^ «microtechnique - Уикисөздік». en.wiktionary.org. Алынған 2019-05-19.
  2. ^ а б в г. e f ж сағ Питер, Г (2014). «Микротехника». Ғылымға қол жеткізу. дои:10.1036/1097-8542.424010.
  3. ^ а б в г. Yeung, E. C. T., Stasolla, C., Sumner, M. J., & Huang, B. Q. (Eds.) (2015). Өсімдіктің микротехникасы мен хаттамалары. Швейцария: Springer International Publishing.CS1 maint: бірнеше есімдер: авторлар тізімі (сілтеме) CS1 maint: қосымша мәтін: авторлар тізімі (сілтеме)
  4. ^ а б в г. e f Визнер., Ф.М. (1968). Жалпы зоологиялық микротехника. Мэриленд, АҚШ: Williams & Wilkins компаниясы.
  5. ^ а б Смит, Г.М. (1915). «Ботаникалық микротехниканың дамуы». Американдық микроскопиялық қоғамның транзакциялары. 34 (2): 71–129. дои:10.2307/3221940. ISSN  0003-0023. JSTOR  3221940.
  6. ^ а б Апатия, S (1896). Die Mikrotechnik der thierischen Morphologie. Брауншвейг.
  7. ^ «wholemount - Уикисөздік». en.wiktionary.org. Алынған 2019-05-19.
  8. ^ а б в г. Нандгагопалан (2013-04-06). «Барлық монтаждық дайындық». Нандха әлемі. Алынған 2019-05-19.
  9. ^ HILLS, P. «Түлектерден кейінгі бағдарламаға арналған оқу бағдарламасы» (PDF).
  10. ^ а б в «SMEAR Дайындық». coproweb.free.fr. Алынған 2019-05-19.
  11. ^ «Жағындыға жабынды дайындауға арналған әдіс - LabCE.com, зертханалық үздіксіз білім беру». www.labce.com. Алынған 2019-05-19.
  12. ^ а б в г. e «Микроскопиялық бақылауға арналған асқабақ үлгілерін қалай дайындау керек - Microbehunter микроскопиясы». Алынған 2019-05-19.
  13. ^ «Парафинге салынған тіндік хаттаманы бөлу | Абкам». www.abcam.com. Алынған 2019-05-19.
  14. ^ «Секциялаудың жетілдірілген әдістері: қиын тіндерді қалай бөлуге болады». Bitesize Bio. 2013-12-17. Алынған 2019-05-19.
  15. ^ а б Рузин, С.Е. (1999). Өсімдіктің микротехникасы және микроскопиясы. Нью-Йорк: Оксфорд университетінің баспасы.
  16. ^ а б «lab3». www.cas.miamioh.edu. Алынған 2019-05-19.
  17. ^ Робертс, Гленн Д .; Ю, Паулин К. В .; Вашингтон, Джон А. (1981), Вашингтон, Джон А. (ред.), «Үлгілерді тікелей микроскопиялық зерттеу», Клиникалық микробиологиядағы зертханалық процедуралар, Springer US, 69–89 бет, дои:10.1007/978-1-4684-0118-9_2, ISBN  9781468401189
  18. ^ «Өсімдіктер анатомиясы_Қолды тегін кесу | Микроскоп | Өсімдіктер сабағы». Скрипд. Алынған 2019-05-19.
  19. ^ «Тіндерді тазарту - LabCE.com, зертханалық үздіксіз білім беру». www.labce.com. Алынған 2019-05-19.
  20. ^ «Тіндердің бөлімдерін тазарту | Ұлттық диагностика». www.nationaldiagnostics.com. Алынған 2019-05-19.
  21. ^ Роллс, Джеффри (2019-04-15). «Үлгілерді өңдеуге кіріспе». Leica биожүйелері.
  22. ^ «Парафинге салынған тіндік хаттаманы бөлу | Абкам». www.abcam.com. Алынған 2019-05-19.
  23. ^ а б «Ендіру | Ұлттық диагностика». www.nationaldiagnostics.com. Алынған 2019-05-19.
  24. ^ «Ендіру».
  25. ^ «Ендіру | Ұлттық диагностика». www.nationaldiagnostics.com. Алынған 2019-05-19.
  26. ^ «Бояу әдістері». www.cliffsnotes.com. Алынған 2019-05-19.
  27. ^ Wilkie, R. N., & Mooradian, A. (1978). Слайдтарды автоматты түрде бояғыш. Вашингтон, Колумбия округі: АҚШ: Патенттік және тауарлық белгілер бөлімі.CS1 maint: бірнеше есімдер: авторлар тізімі (сілтеме)
  28. ^ Kacena, M., Troiano, N. W., Wilson, KM, Coady, C. E., & Horowitz, M. C. (2004). «Екі түрлі метилметакрилатты өңдеу, инфильтрация және енгізу әдісін гистологиялық, гистохимиялық және иммуногистохимиялық талшықтардың сүйек үлгілерін бағалау». Гистотехнология журналы. 27 (2): 119–130. дои:10.1179 / оның.2004.27.1.15. S2CID  86700855.CS1 maint: бірнеше есімдер: авторлар тізімі (сілтеме)
  29. ^ а б «Тіндерді парафинмен өңдеу». Онлайн хаттамалар. 2010-06-24. Алынған 2019-05-19.
  30. ^ Браун, В (1915). «Паразитизм физиологиясындағы зерттеулер: I. Botrytis cinerea әрекеті». Ботаника шежіресі. 29 (115): 313–348. дои:10.1093 / oxfordjournals.aob.a089551.
  31. ^ а б Джейкоби, Дж. Г. В. (1953). Микротомды пышақ. Патенттік және тауарлық белгілер кеңсесі.
  32. ^ Паппас, В.В. (1971). «Парафин секциялары үшін жалпы желім ретінде хром алюминий-желатинді (суббингтік) ерітіндіні қолдану». Дақ технологиясы. 46 (3): 121–124. дои:10.3109/10520297109067835. PMID  4105404.
  33. ^ Хаупт., А.В. (1930). «Парафин секцияларына арналған желатинді бекітетін зат». Дақ технологиясы. 5 (3): 97–98. дои:10.3109/10520293009115555.
  34. ^ Ветмор, Э.Х. (1932). «Целлоидинді ботаникалық техникада қолдану». Дақ технологиясы. 7 (2): 37–62. дои:10.3109/10520293209116071.
  35. ^ а б Бейкер, Дж. Р. (1933). Цитологиялық әдіс. Лондон: Methuen And Co. Ltd.
  36. ^ «celloidin - Уикисөздік». en.wiktionary.org. Алынған 2019-05-19.
  37. ^ Portmann, D., Fayad, J., Wackym, P. A., Shiroishi, H., Linthicum Jr, F. H., and Rask ‐ Andersen, H. (1990). «Электронды микроскопия үшін целоидин қималарын қайта құрастыру әдістемесі». Ларингоскоп. 100 (2): 195–199. дои:10.1288/00005537-199002000-00017. PMID  2405230. S2CID  1645611.CS1 maint: бірнеше есімдер: авторлар тізімі (сілтеме)
  38. ^ Plowman, A. B. (1904). «Пловман, А.Б. Целлоидин әдісі қатты тіндермен». Ботаникалық газет. 37 (6): 456–461. дои:10.1086/328510.
  39. ^ а б «Криостатты бөлуге арналған тіндерді мұздату әдістері» (PDF).
  40. ^ Нокс, Р.Б. (1970). «Өсімдік тіндерін мұздату секциясы». Дақ технологиясы. 45 (6): 265–272. дои:10.3109/10520297009067799. PMID  5490087.
  41. ^ а б «Гистологияға арналған тіндерді мұздату» (PDF).
  42. ^ Дж.Бирва-Нефф, Кимберли; Каннингэм, Майлз (2012-07-12). «Мұздату биологиялық үлгілері». Журналға сілтеме жасау қажет | журнал = (Көмектесіңдер)