HUMARA талдауы - HUMARA assay

HUMARA талдауы - ісіктің клонды шығу тегін анықтайтын кең қолданылатын әдістердің бірі.[1][2] Әдіс негізделген Х хромосомалардың инактивациясы және ол әр түрлі болу артықшылығын алады метилдену HUMARA деп аталатын геннің мәртебесі (адам үшін қысқа) андроген рецепторы ) орналасқан Х хромосома. Бір рет Х хромосома жасушада инактивтелгенін ескере отырып,[3] одан шыққан барлық жасушалардың бірдей X хромосомасы инактивтелген болады, бұл тәсіл а-ны ажырату үшін тамаша құралға айналады моноклоналды әйелдер тканіндегі поликлоналды популяция. HUMARA гені, атап айтқанда, мақсатқа өте ыңғайлы ететін үш маңызды ерекшелікке ие.

1-) Ген Х хромосомасында орналасқан және қалыпты жағдайда метилдену арқылы инактивациядан өтеді эмбриогенез әйел нәрестенің.[3] Х хромосомасындағы гендердің көпшілігінде емес, көбінде активацияланбайтындығында, бұл ерекшелік маңызды болып табылады.

2-) адамның андрогендік рецепторлық гені аллельдер CAG қайталануының әр түрлі сандары бар.[4] Осылайша, қашан ДНҚ сау аналық тіннен күшейеді ПТР геннің белгілі бір аймағы үшін гельде бөлінген екі жолақты көруге болады.

3-) ПТР-мен күшейтілген аймақтың белгілі бір базалық тапсырыстары бар, олар оны сіңіруге бейім етеді. HpaII (немесе HhaI) ферменті метилденбеген кезде.[4] Бұл деталь зерттеушілерге метилденген аллельді метилденбеген аллельді айыруға мүмкіндік береді.

HUMARA генінің осы қасиеттерінің арқасында әйел сүтқоректілер ағзасынан кез-келген тіннің клонды шығу тегі анықталуы мүмкін.

Негізгі процесс келесідей орындалады:

1-) тіннен алынған ДНҚ бөлінеді.

2-) Оқшауланған ДНҚ қолайлы ферментпен (мысалы, HpaII) оңтайлы жағдайда ұсынылған уақыт ішінде өңделеді (яғни бір түнде).

3-) ДНҚ тазартылады және HUMARA генінің белгілі бір аймағы ПТР көмегімен «қолайлы» праймерлер көмегімен күшейтіледі (мысал, қараңыз: Ref.2)

4-) ПТР өнімдерін гель арқылы өткізгеннен кейін гель көзге елестетіледі және нәтижелер сәйкесінше талданады. Егер екі жолақ айқын болса, зерттелген ұлпа, ең алдымен, поликлоналды шыққан болуы мүмкін. Егер бір жолақ байқалса, онда тін екі моналлонды болады, егер екі аллельде CAG қайталануының саны бірдей болмаса немесе бірдей инактивацияланған әр түрлі жасушалар ісік қоздырса; сондықтан, моноклоналды болып көрінеді, бірақ іс жүзінде поликлоналды.

Ісік клондылығы туралы қорытынды жасау үшін ДНҚ-ны сол адамның қалыпты тінінен қолданған дұрыс, сонымен қатар бақылау ретінде ферменттік емдеусіз үлгіні күшейту керек. Егер ферменттермен емделмеген қалыпты тіндерде де бір жолақ байқалса, оны келесідей түсіндіруге болады; бұл адамда XO сияқты генетикалық заңдылық бар (бұл мүмкіндікті ферментпен емдегеннен кейін жолақты көруге болмайды, өйткені егер XO үлгінің генетикалық үлгісі болса, онда метилляция болмайды, сондықтан ас қорытқаннан кейін ешқандай жолақ көрінбеуі керек Ферментті емдеуден кейін диапазонды көрген жағдайда, байқау, адамның екі бірдей Х хромосомасы бар екенін білдіреді, дәл CAG қайталанады.) Қалыпты тіндерге арналған екі жолақты көргенде (емделген және емделмеген фермент) және сіз ферменттермен өңделген ісік үлгілері үшін екі жолақты, ал емделмеген ісік ДНҚ-сы үшін екі жолақты көресіз, сонда сіз поликлоналды ісікке қарап отырсыз. Алайда, егер сіз ферменттерді емдеуден кейін бірдей жолақты тек бір жолақпен көрсеңіз, сізде қызығушылық тудыратын ісіктің моноклоналды болу мүмкіндігі өте жоғары. Бұл соңғы жағдайда моноклондылық анық емес, өйткені жоғарыда айтылғандай, екі аллельде бірдей -CAG қайталану мүмкіндігі бар.

Пайдаланылған әдебиеттер

  1. ^ Парсонс, Барбара Л. (2008-10-01). «Ісіктердің көптеген әр түрлі типтері поликлональды болып келеді: дәлелдер мен салдары» (PDF). Мутациялық зерттеулер. 659 (3): 232–247. дои:10.1016 / j.mrrev.2008.05.004. ISSN  0027-5107. PMID  18614394.
  2. ^ Комертпай, Сабахаттин; Пасторино, Сандра; Танжи, Мика; Меззапель, Розанна; Страйанес, Ориана; Наполитано, Андреа; Бауманн, Францина; Вейгель, Трейси; Фридберг, Джозеф (2014-01-01). «Қатерлі мезотелиоманың клонды шығу тегін бағалау». Аударма медицина журналы. 12: 301. дои:10.1186 / s12967-014-0301-3. ISSN  1479-5876. PMC  4255423. PMID  25471750.
  3. ^ а б Гартлер, С.М .; Riggs, A. D. (1983-01-01). «Сүтқоректілердің Х-хромосомаларын инактивациялау». Жыл сайынғы генетикаға шолу. 17: 155–190. дои:10.1146 / annurev.ge.17.120183.001103. ISSN  0066-4197. PMID  6364959.
  4. ^ а б Аллен, Р. С .; Зогби, Х. Й .; Мозли, А.Б .; Розенблатт, Х. М .; Белмонт, Дж. В. (1992-12-01). «Адамның андроген-рецепторлық генінде полиморфты CAG қайталануының жанында HpaII және HhaI учаскелерінің метилденуі Х хромосомалардың инактивациясымен корреляцияланады». Американдық генетика журналы. 51 (6): 1229–1239. ISSN  0002-9297. PMC  1682906. PMID  1281384.