Гентамицинді қорғауға арналған талдау - Gentamicin protection assay

The гентамицинді қорғауға арналған талдау немесе өмір сүру талдауы немесе басып кіруді талдау -де қолданылатын әдіс микробиология. Ол қабілеттілігін сандық бағалау үшін қолданылады патогенді бактериялар басып кіру эукариотты жасушалар.

Талдау 1970-жылдары жүргізілген бірнеше бақылауларға негізделген, оларда іштегі бактериялардың өлімнен аулақ болу қабілеті антибиотиктер туралы хабарланды.[1][2] Талдау қолданыла бастады биологиялық зерттеулер 1980 жылдардың басында.

Фон және принцип

Жасуша ішілік бактериялар енуі керек хост жасушалары (жасушалар туралы инфекцияланған организм ) үшін қайталау және инфекцияны көбейту. Көптеген түрлері Шигелла (себептері бациллярлы дизентерия ), Сальмонелла (іш сүзегі ), Микобактериялар (алапес және туберкулез ) және Листерия (листериоз ), кейбіреулері, жасушаішілік.

Бірнеше антибиотиктер эукариоттық жасушаларға ене алмайды. Сондықтан бұл антибиотиктер жасуша ішілік бактерияларды зақымдай алмайды. Мұндай антибиотиктерді қолдану эукариоттық жасушаларға енетін бактериялар мен енбейтін бактерияларды ажыратуға мүмкіндік береді. Мұндай антибиотикті а мәдениет бактериялармен жұқтырылған эукариотты жасушалардың ішіне енген жасушаларды аямай, клеткалардың сыртында қалған бактерияларды өлтіреді. Бұл талдау үшін антибиотик таңдау болып табылады аминогликозид гентамицин.

Процедура

Гентамициннің химиялық құрылымы

ХеЛа жасушалар әдетте гентамициннен қорғаныс талдауларында эукариоттық жасушалар ретінде қолданылады, бірақ басқа жасушаларды да қолдануға болады. Бактерияларға келетін болсақ, тек гентамицинге сезімтал түрлерді талдауға болады.

Талдау пластикте жүргізіледі микротриттер, әдетте олар қолданылады зертханалар эукариотты жасушаларды өсіру үшін. Ұяшықтарда түні бойына жасушалар өсіп, тегіс қабат құруға рұқсат етіледі. Бір түнде бактериялар бөлек өсіріледі. Келесі күні эукариотты жасушалар болады егілген бактериялармен бірге және бір сағат бойы бірге өсіріледі. Центрифугалау бірнеше минут ішінде плиталар жасушалар мен бактерияларды байланыста ұстап, инфекцияны бастауға көмектеседі.

Инфекциядан кейін плиталарға гентамицин қосылады және олар антибиотикке клеткаларға ене алмаған және сыртта қалған барлық бактерияларды жоюға мүмкіндік беріп, бір сағат бойы инкубациялайды. Содан кейін плиталар өлі бактерияларды жою үшін жақсы жуылады. Келесі кезекте эукариотты жасушалар орналасқан лизис пайдалану жуғыш зат, көбінесе Triton X-100.

Жасушаларға еніп, тірі қалған бактериялар енді босатылды және олар қапталған қатты орта тәрелкелер. Келесі күні плиталарда пайда болған колонияларды санау және талдаудың басында қанша бактерия қолданылғанын білу зерттеушіге эукариоттық жасушаларға шабуыл жасай алған бактериялардың пайызын есептеуге мүмкіндік береді.

Қолданылуы, артықшылықтары және ескертулері

Гентамициннен қорғаныс анализі көбінесе патогенді зерттеуде қолданылады. Ерекше үлес гендер немесе белоктар осы әдіс арқылы бактериялардың жасушаларға ену қабілеттілігін оңай анықтауға болады. Қарастырылып отырған ген болуы мүмкін нокаут және бактериялардың инвазивтілігі қалыпты жағдаймен салыстырғанда, жабайы түрі бактериялар. Сияқты қоршаған орта жағдайлары рН деңгей және температура, олардың инвазивтілікке әсері үшін де сараптауға болады.

Гентамициннен қорғаныс талдауы өте сезімтал, өйткені ол тіпті жалғыз бактериялардың ішкі қабілетін анықтай алады. Оның бірнеше кемшіліктері бар:

  • Гентамицин кейде эукариотты жасушаларға еніп, ішкі бактерияларды жоя алады. Бұл жағдай орын алуы мүмкін өткізгіштік талдау кезінде клеткалардың қандай-да бір мөлшері көбейіп кетті, кейде жасушалармен дұрыс жұмыс істемеу салдарынан.
  • Ішкі бактериялар кейде сыртқы ортадан толығымен қорғалмауы мүмкін, мысалы фагосома ( вакуоль жасуша ішіндегі бактерияны қоршау) қандай да бір жолмен ақаулы. Гентамицин бұл бактерияларды жоюы мүмкін.
  • Гентамицин жасушалардан тыс қалған барлық бактерияларды өлтіре алмауы мүмкін.

Белгілі бір талдаудың дәлдігін бағалауға көмектесу үшін оң және теріс бақылау орындалуы керек. Талдауды жоғарыда сипатталғандай жүргізген кезде толығымен инвазивті (оң бақылау) деп аталатын бактериялар мен инвазивті емес (теріс бақылау) деп аталатын бактерияларды талдау құрамына қосу керек.

Балама инвазиялық талдау дифференциалды болып табылады иммундық бояу байланыстыруға негізделген талдау антиденелер шабуылға дейінгі және кейінгі бактерияларға. Антиденелер шығарады люминесцентті, түсті жарық, және осы талдаудың нәтижелері астында қарастырылады микроскоп.

Сондай-ақ қараңыз

Әдебиеттер тізімі

  1. ^ Mandell GL (1973). «Интралеукоцитарлы бактериялар мен антибиотиктердің өзара әрекеттесуі». J Clin Invest. 52 (7): 1673–1679. дои:10.1172 / JCI107348. PMC  302442. PMID  4718959.
  2. ^ Vaudaux P және Waldvogel FA (1979). «Гентамициннің антибактериалды белсенділігі адамның полиморфонуклеарлы лейкоциттері қатысуымен». Микробқа қарсы агенттер. 16 (6): 743–749. дои:10.1128 / aac.16.6.743. PMC  352946. PMID  533256.