Функционалды клондау - Functional cloning

Функционалды клондау экспериментінде таңдауды қолдануға арналған жұмыс процесі. Мұнда тек гендер қамтамасыз етеді ампициллин қарсылық таңдалады.

Функционалды клондау Бұл молекулалық клондау кодталған туралы алдын-ала білуге ​​негізделген техника ақуыз Ның жүйелі немесе функциясы үшін ген сәйкестендіру.[1][2][3] Бұл талдауда а геномдық немесе cDNA кітапханасы қызығушылық тудыратын ақуыздың генетикалық дәйектілігін анықтау үшін скринингтен өтеді. Өрнек cDNA кітапханаларын экранға шығаруға болады антиденелер қызығушылық тудыратын ақуызға тән немесе ақуыз функциясы арқылы сұрыптауға сенуі мүмкін.[1] Тарихи ақуыздың аминқышқылдарының бірізділігі сол кездегі деградацияланған олигонуклеотидтерді дайындау үшін қолданылған зерттелген қызығушылық ақуызын кодтайтын генді анықтау үшін кітапханаға қарсы.[2][3] Қызығушылық генін алып жүретін кандидаттық клондар анықталғаннан кейін, олар анықталады тізбектелген және олардың жеке басын растайды. Бұл клондау әдісі зерттеушілерге тұтас скрининг жүргізуге мүмкіндік береді геномдар геннің орналасуы немесе генетикалық реттілігі туралы алдын-ала білместен.[1]

Бұл әдісті бір ағзадан екінші организмге ұқсас ақуыздарды кодтайтын гендерді анықтау үшін қолдануға болады.[4] Сол сияқты, бұл техниканы жұптастыруға болады метагеномды романның идентификациясы сияқты ұқсас функцияларды орындайтын роман гендері мен белоктарын анықтауға арналған кітапханалар антибиотиктер скрининг арқылы бета-лактамаза қатысуымен немесе өсуіне таңдау пенициллин.[5]

Тәжірибелік жұмыс процесі

Геномдық кітапхана Saccharomyces cerevisiae хост.

Функционалды клондау экспериментінің жұмыс процесі генетикалық материалдың қайнар көзіне, ақуызды немесе қызығушылық тудыратын генді алдын-ала білу дәрежесіне және ақуыздың қызметін скринингтеу мүмкіндігіне байланысты өзгереді. Жалпы, функционалды клондау эксперименті төрт кезеңнен тұрады: 1) үлгілерді жинау, 2) кітапхананы дайындау, 3) скрининг немесе таңдау және 4) реттілік.

Үлгілерді жинау

Генетикалық материал биологиялық сұраққа қатысты белгілі бір жасуша түрінен, организмнен немесе қоршаған ортаның үлгісінен жиналады. Функционалды клондау кезінде мРНҚ әдетте оқшауланған және кДНҚ оқшауланған мРНҚ-дан дайындалады (РНҚ экстракциясы ).[6] Белгілі бір жағдайларда геномдық ДНҚ оқшаулануы мүмкін, әсіресе қоршаған орта сынамалары генетикалық материал көзі ретінде пайдаланылған кезде.[1]

Кітапханаға дайындық

Егер бастапқы материал болса геномдық ДНҚ, ДНҚ-ға сәйкес ұзындықтағы фрагменттерді алу үшін кесіледі вектор таңдау. Содан кейін ДНҚ фрагменттері немесе кДНҚ өңделеді шектеу эндонуклеазалар және байланған а плазмида немесе хромосомалық векторлар. Егер протеинді немесе оның функциясын анықтайтын анализдер болса, ан өрнек векторы гендік өнімнің экспрессиялануын қамтамасыз ету үшін қолданылады. Векторды таңдау дұрыс экспрессияны қамтамасыз ету үшін және кодталған геннің вектордың кірістіру өлшемі шегіне енуін қамтамасыз ету үшін ДНҚ немесе кДНҚ шығу тегіне байланысты болады.[7]

Хостты таңдау маңыздылығын қамтамасыз ету үшін маңызды кодонды пайдалану донор организмге ұқсас болады. Сондай-ақ, хост қажет екеніне кепілдік беруі керек аудармадан кейінгі модификация және ақуызды бүктеу экспрессияланған ақуыздардың дұрыс жұмыс істеуін қамтамасыз ету үшін пайда болады.[7]

Скрининг немесе таңдау

Дайындалған геномдық немесе cDNA кітапханаларын қызығушылық геніне скрининг әдісі эксперименттік дизайн мен биологиялық сұраққа байланысты өте өзгермелі. Скринингтің бір әдісі: зонд арқылы колониялар Оңтүстік блотинг сұрау ақуызының аминқышқылдарының дәйектілігінен дайындалған деградацияланған олигонуклеотидтермен.[8] Экспрессиялық кітапханаларда қызығушылық ақуызын сұрау ақуызына тән антиденемен скрининг арқылы анықтауға болады Батыс өшіру қызығушылық генін алып жүретін колонияларды анықтау. Басқа жағдайларда, протеиннің белсенділігін таңдау немесе таңдау үшін арнайы талдауды қолдануға болады.[1] Мысалы, гендер антибиотикке төзімділік кітапхананың колонияларын көрсетілген тасымалдағыштарда өсіру арқылы таңдауға болады антибиотик.[5] Тағы бір мысал - скрининг ферментативті белсенділік оңай көзге көрінетін колориметриялық қосылысқа катализденетін субстратпен инкубациялау арқылы.[9]

Тізбектеу

Функционалды клондаудың соңғы кезеңі мынада жүйелі экранда немесе таңдау кезеңінде сәтті анықталған клондардан алынған ДНҚ немесе кДНҚ. Содан кейін дәйектілікке түсініктеме беріп, ағынды қосымшалар үшін қолдануға болады, мысалы ақуыздың экспрессиясы және тазарту өндірістік қосымшаларға арналған.[10]

Артықшылықтары

Функционалды клондаудың артықшылықтарына өсіру мүмкін емес организмдерде, атап айтқанда бактериалды немесе вирустық үлгілерде қажет қосымшалары бар жаңа гендерді скринингтен өткізу мүмкіндігі жатады.[1] Сонымен қатар, протеиндердің функцияларын скринингтеу мүмкіндігіне байланысты тізбектік ұқсастық төмен болған кезде, байланысты функциялары бар ақуыздарды кодтайтын гендерді анықтауға болады. Функционалды клондау организмнің геномының реттілігі немесе геном ішіндегі геннің орналасуы туралы алдын-ала білмей генді сәйкестендіруге мүмкіндік береді.[1]

Шектеулер

Басқа клондау әдістері сияқты, векторлық және хосттық таңдау клондық ауытқудың арқасында функционалды клондау арқылы гендерді сәйкестендіруге әсер етеді. Векторда көрсетілген протеиннің бүкіл ДНҚ тізбегін орналастыратын кірістіру өлшемі болуы керек. Сонымен қатар, өрнек векторларында промоутерлер және терминаторлар таңдалған қабылдаушы организм шеңберінде жұмыс істеуі керек. Хост таңдауы әсер етуі мүмкін транскрипция және аударма ерекшеленуіне байланысты кодонды пайдалану, транскрипциялық және аударма машиналары немесе аудармадан кейінгі модификация хост ішінде.[7][1]

Басқа шектеулерге еңбекті қажет ететін кітапхананы дайындау және қымбат әрі ұзақ уақытты қажет ететін әлеуетті экрандар жатады.[7]

Альтернативті тәсілдер

Позициялық клондау

Оңтайлы клондау стратегиясы туралы шешім қабылдауға арналған схема.

Позициялық клондау қызығушылық генін анықтауға арналған тағы бір молекулалық клондау әдісі. Бұл әдіс геннің идентификациясын бағыттау үшін функцияның орнына дәл хромосомалық орналасуды қолданады.[11] Осыған байланысты, бұл әдіс хромосомадағы барлық генетикалық материалға бағытталған локус және функция туралы ешқандай болжам жасамайды.[11] Жылы модельді организмдер сияқты тышқандар немесе ашытқы, бұл әдіс жиі қолданылады, өйткені қызығушылық генінің жағдайы туралы ақпаратты мына жерден алуға болады тізбектелген геном. Алайда, бұл әдіс дәйектілік туралы ақпарат болмаған кезде әлдеқайда күрделі болады. Бұл жағдайда, байланыстырып талдау пайдалануға болады.[11] Функционалды клондау, мысалы, организмдерде оңай қолданылады бактериялық қоздырғыштар бұл өміршең, бірақ мәдениетсіз және дәйектілік туралы деректер жоқ болса, бірақ гендердің гомологиясы немесе ақуыздың қызметі әлі де қызығушылық тудырады.[11]

Функционалды және позициялық клондауды ажырату тәсілі - гендерді сөз ретінде бейнелеу. Функционалды клондау сөздерді іздеу үшін тезаурусты қолдану және мағыналары бірдей (немесе қызметтері) жаңа сөздерді таңдау сияқты.[12] Позициялық клондау сөздіктің белгілі бір бетін таңдап, содан кейін кез-келген қызықты сөз үшін тек сол парақты шолуға ұқсас.[12]

Гомологияны есептеу арқылы анықтаңыз

Келуімен реттілік технология арзандаған сайын, белгісіз геномды ретке келтіріп, содан кейін есептеу арқылы анықтауға болады гомология скринингтің орнына.[13] Бұл қызығушылықтың бірнеше генін бір уақытта тексеруге мүмкіндік беретін қосымша пайда әкеледі және эксперимент уақытын қысқартады. Бұл сонымен қатар көп еңбекті қажет ететін клондау процедураларынан аулақ болуға мүмкіндік береді.[14] Алайда, егер бұл бағыт бойынша жүрсе, басқа да кедергілерді ескеру керек. Тізбектелген деректерді қолдану арқылы адам тек гомологияға сүйене отырып экраннан шыға алады.[1] Осылайша, функцияларға негізделген тәсіл жаңа ферменттерді табуға мүмкіндік береді, олардың функциялары тек ДНҚ дәйектілігі негізінде болжанбаған болар еді.[1] Сондықтан, секвенирлеу эксперименттік тұрғыдан аз еңбекті қажет етеді, сонымен қатар байланысты функцияның гендеріндегі әр түрлі реттілік гомологиясына байланысты қызығушылықтың жоғалып кеткен гендеріне әкелуі мүмкін.

Гибсон жиналысы

Гибсон жиналысы үш негізгі ферменттер қолданылатын жылдам клондау әдісі; 5 ' экзонуклеаза, полимераза және лигаза.[15] Экзонуклеаза 3 'асып кететін ДНҚ фрагменттерінің 5' ұшын сіңіреді.[15] Егер ДНҚ кірістіруінің әр шетінде маңызды гомология (20-40 а.к.) болса, онда ол қосымша омыртқамен күйдірілуі мүмкін.[15] Содан кейін полимераза олқылықтардың орнын толтыра алады, ал лигаза аяғында тырнақтарды біріктіреді.[15] Бұл әдіс клондау жылдамдығын және векторлық магистральға көшірудің сәттілік коэффициентін едәуір арттырады.[15] Дегенмен, ДНҚ фрагменті плазмидамен маңызды гомологияны қажет етеді.[15] Осы себепті клонданатын кезек туралы білім алдын-ала белгілі болуы керек. Бұл функционалды клондау кезінде талап емес.

TOPO клондау

TOPO клондау қолданатын клондау әдісі болып табылады Так полимеразы.[16] Себебі Тақ жалғыз қалдырады аденозин 3 ’аяғында асып кету ПТР реакция өнімдері.[16] Осы білімді қолдана отырып, 5 ’ тимин асып кетуді клондау мақсатында пайдалануға болады.[16] Бұл жағдайда клонданатын фрагмент туралы білім ол үшін ПТР праймерін жасай алатындығымен белгілі болуы керек және TOPO клондауымен үйлесімді векторларының саны салыстырмалы түрде аз. Алайда, бұл реакцияны жасау үшін тек 5 минут уақыт қажет болатын артықшылығы бар.[16]

Шлюзді рекомбинациялық клондау

Шлюзді рекомбинациялық клондау - ДНҚ фрагменті бір плазмида омыртқасынан екіншісіне жылжытылатын клондау әдісі гомологиялық рекомбинация іс-шара.[17] Алайда, бұл әдіс жұмыс істеуі үшін, қызығушылық тудыратын ДНҚ фрагментін рекомбинация учаскелері қоршауы керек.[17] Бұл әдіс қатаң түрде балама болмаса да, жаңа геномдық кітапхана құрғаннан гөрі ДНҚ фрагменттерінің бір плазмидадан екіншісіне тез қозғалуына мүмкіндік береді. Бұл әдісті функционалды клондау кезінде қолдануға болатын себебі - кітапхананы басқа промотордың астына немесе басқа таңдау маркері бар магистральға қою.[17] Егер бұл мәселе бактериялардың кең ауқымында функционалды клондауды көргісі келсе, бұл ыңғайлы болуы мүмкін кодонның бейімділігі.[17][7]

Қолданбалар

Қоршаған ортадағы гомологияны анықтау

Метагеномика - бұл функционалды клондауды жиі қолданатын ең үлкен өрістердің бірі. Метагеномика белгілі бір қоршаған орта үлгісіндегі барлық генетикалық материалдарды зерттейді, мысалы, ішек микробиомасы немесе көл суы.[1] Функционалды кітапханалар қоршаған ортаның ДНҚ фрагменттері бар жасалады.[1] ДНҚ тізбегі пайда болған бастапқы бактерияны оңай табу мүмкін болмағандықтан, метагеномиялық функционалды кітапханаларды құрудың артықшылығы бар. Барлық бактериялардың 1% -дан азы зертханада оңай өсіріледі, өсіруге болмайтын бактериялардың үлкен пайызы қалады.[18] Функционалды кітапханаларды қолдану арқылы әлі де өңделмейтін бактериялардың гендік функцияларын зерттеуге болады.[1] Сонымен қатар, бұл өсірілмеген микробтар биотехнологиялық қосымшалары бар жаңа ферменттердің ашылуына мүмкіндік береді. Теңіз орталарынан табылған кейбір жаңа белоктарға протеазалар, амилазалар, липазалар, хитиназалар, дезоксирибонуклеазалар және фосфатазалар сияқты ферменттер жатады.[19]

Белгілі түрдегі гомологияны анықтау

Бір көзден алынған ген гомологы басқа ағзада бар-жоқтығын анықтау қажет болатын жағдайлар бар. Мысалы, романның сәйкестендірілуі ДНҚ-полимераздар үшін полимеразды тізбекті реакция (ПТР) ДНҚ молекулаларын дезоксирибонуклеотидтерден синтездейтін реакциялар.[20] Адамның полимеразы 37 ° C (98,6 ° F) температурада оңтайлы жұмыс істесе, ДНҚ 94–98 ° C (201–208 ° F) дейін денатурацияланбайды.[20] Бұл проблема туғызады, өйткені осы температурада ПТР реакциясының денатурация сатысында адамның ДНҚ-полимеразы денатурацияға ұшырайды, нәтижесінде жұмыс істемейтін полимераза ақуызы пайда болады және ПТР сәтсіз болады. Мұнымен күресу үшін а-дан ДНҚ-полимераза термофил немесе жоғары температурада өсетін бактерияларды қолдануға болады. Мысалы Так полимеразы ол термофильді бактериядан шығады Thermus aquaticus.[20] Жоғары температурада термостабильді болудың қосымша артықшылығы бар гомологты полимераздарды табу үшін функционалды клондау экранын орнатуға болады.

Осыны ескере отырып, қазіргі кезде тағы бір полимераза ферменті - 3173 полимераза қолданылады RT-PCR реакциялар жоғарыдағы теорияны қолдану арқылы ашылды.[21] RT-PCR реакцияларында әдетте екі бөлек ферменттер қолданылады. Біріншісі - ретровирус кері транскриптаза түрлендіру РНҚ дейін кДНҚ.[21] Екіншісі - мақсатты реттілікті күшейту үшін термостабильді ДНҚ-полимераза.[21] 3173 Полимераза ферментативті екі функцияны да орындай алады, нәтижесінде RT-PCR үшін опция жақсы болады.[21] Фермент бастапқыда Йеллоустоун ұлттық паркіндегі Octopus ыстық бұлақтарында (93 ° C) кездесетін вирустық хосттан функционалды клондау көмегімен анықталды.[21]

Адам денсаулығына арналған қосымшалар

Бактериялық инфекцияны емдеудің үздіксіз проблемаларының бірі болып табылады антибиотикке төзімділік Пациенттер дәрі-дәрмектерді толық емдемегенде және бактериялардың уақыт өте келе антибиотиктерге төзімді болуына мүмкіндік берген кезде пайда болады.[22] Антибиотиктерге төзімділікпен қалай күресу керектігін түсіну үшін бактериалды геномның қалай дамып жатқанын және дені сау адамдарда антибиотиктерді қолданбайтын жағдайларды білу қажет.[22] Функционалды клондау әдісін қолданып, адамнан оқшауланған ДНҚ микрофлора ішіндегі өрнек векторларына клондалған Ішек таяқшасы.[22] Содан кейін антибиотиктер экран ретінде қолданылды.[22] Егер плазмида құрамында антибиотикке төзімділікті қамтамасыз ететін генді кірістіру болса, жасуша тірі қалып, тақтада таңдалған.[22] Егер кірістіру ешқандай қарсылық көрсетпесе, жасуша өліп, колония құрмаған.[22] Тірі қалған жасуша колонияларын іріктеу негізінде антибиотикке төзімділікке ықпал ететін генетикалық факторлардың жақсы көрінісі жасалды. Анықталған қарсыласу гендерінің көпшілігі бұрын белгісіз болған.[22] Функционалды клондау әдісінің көмегімен антибиотиктерге төзімділік тудыратын гендерді анықтауға болады, бактериялық инфекциялардың емін жақсы түсіну үшін.

Сондай-ақ қараңыз

Әдебиеттер тізімі

  1. ^ а б c г. e f ж сағ мен j к л м Лэм, Кэти Н .; Чэн, Дзюцзюнь; Энгель, Катя; Нойфелд, Джош Д .; Чарльз, Тревор С. (2015). «Функционалды метагеномиканың қазіргі және болашақ ресурстары». Микробиологиядағы шекаралар. 6: 1196. дои:10.3389 / fmicb.2015.01196. ISSN  1664-302X. PMC  4625089. PMID  26579102.
  2. ^ а б Оксфорд биохимиясы және молекулалық биология сөздігі. Каммак, Ричард, Ph.D (Аян.) Оксфорд: Оксфорд университетінің баспасы. 2006 ж. ISBN  9780198529170. OCLC  65467611.CS1 maint: басқалары (сілтеме)
  3. ^ а б Шиндлер-Хён; Хон, Холгер (2007-01-01). Фанкони анемиясы: қатерлі ісік пен қартаюды түсінуге арналған парадигматикалық ауру. Каргердің медициналық және ғылыми баспалары. ISBN  9783805582773.
  4. ^ Скёт, М .; Кауппинен, С .; Кофод, Л .; Фуглсанг, С .; Паулы, М .; Дальбёге, Х .; Андерсен, Л. (2001-07-01). «Aspergillus aculeatus-тен эндо-арабинаназаны функционалды клондау және оның A. oryzae мен темекідегі гетерологиялық көрінісі». Молекулалық генетика және геномика. 265 (5): 913–921. дои:10.1007 / s004380100489. ISSN  1617-4615.
  5. ^ а б Аллен, Хизер К; Moe, Люк А; Родбумрер, Джитсупанг; Гаардер, Андра; Handelsman, Jo (2008-10-09). «Функционалды метагеномика шалғайдағы Аляска топырағында әртүрлі β-лактамазаларды анықтайды». ISME журналы. 3 (2): 243–251. дои:10.1038 / ismej.2008.86. ISSN  1751-7370. PMID  18843302.
  6. ^ Шыжан, Анн М .; Хелдин, Параскеви; Қасапшы, Евгений С .; Йошино, Тадаши; Брискин, Майкл Дж. (1996-09-20). «Адамның гиалуронан синтезі үшін cDNA функционалды клондау». Биологиялық химия журналы. 271 (38): 23395–23399. дои:10.1074 / jbc.271.38.23395. ISSN  0021-9258. PMID  8798544.
  7. ^ а б c г. e Лодиш, Харви; Берк, Арнольд; Зипурский, С.Лоуренс; Матсудайра, Павел; Балтимор, Дэвид; Дарнелл, Джеймс (2000). «ДНҚ кітапханаларын λ фазалық және басқа клондау векторларымен құру». Журналға сілтеме жасау қажет | журнал = (Көмектесіңдер)
  8. ^ Мельхой, Майкл; Верма, Раджеев; Рейтер, Қасқыр-Дитер (2004-07-01). «Өсімдіктердегі d-галактуронаттың биосинтезі. Арабидопсистен мембраналық-якорлы UDP-d-глюкуронат 4-эпимеразаның функционалды клондануы және сипаттамасы». Өсімдіктер физиологиясы. 135 (3): 1221–1230. дои:10.1104 / б.104.043745. ISSN  0032-0889. PMC  519042. PMID  15247385.
  9. ^ Чэн, Дзюцзюнь; Романцов, Татьяна; Энгель, Катя; Докси, Эндрю С .; Роуз, Дэвид Р .; Нойфелд, Джош Д .; Чарльз, Тревор С. (2017-03-08). «Функционалды метагеномика гендік реттіліктен болжанбайтын роман-галактозидазаны анықтайды». PLOS ONE. 12 (3): e0172545. Бибкод:2017PLoSO..1272545C. дои:10.1371 / journal.pone.0172545. ISSN  1932-6203. PMC  5342196. PMID  28273103.
  10. ^ Вестер, Ян Кьельхеде; Жалт-жұлт еткен Миккель Андреас; Stougaard, Peter (2014-05-20). «Өндірістік әлеуеті бар жаңа ферменттерді функционалды метагеномика мен культивацияның қосындысы арқылы суық және сілтілі ортадан табу». Микробты жасуша фабрикалары. 13: 72. дои:10.1186/1475-2859-13-72. ISSN  1475-2859. PMC  4035831. PMID  24886068.
  11. ^ а б c г. Пулити, Алдамария; Кариди, Джанлюка; Раваззоло, Роберто; Гигджери, Джан Марко (2007-12-01). «Молекулалық генетиканы оқыту: 4 тарау - генетикалық бұзылыстарды позициялық клондау». Педиатриялық нефрология. 22 (12): 2023–2029. дои:10.1007 / s00467-007-0548-5. ISSN  0931-041X. PMC  2908434. PMID  17661092.
  12. ^ а б Рэнд, Элизабет Б. (1998-02-01). «Алагилл синдромының генетикалық негіздері». Педиатриялық гастроэнтерология және тамақтану журналы. 26 (2): 234–236. дои:10.1097/00005176-199802000-00024. ISSN  0277-2116.
  13. ^ Шендуре, Джей; Баласубраманиан, Шанкар; Шіркеу, Джордж М .; Гилберт, Уолтер; Роджерс, Джейн; Шлосс, Джефери А .; Уотерстон, Роберт Х. (2017). «40-та ДНҚ секвенциясы: өткен, қазіргі және болашақ». Табиғат. 550 (7676): 345–353. Бибкод:2017 ж .550..345S. дои:10.1038 / табиғат 24286. ISSN  1476-4687. PMID  29019985.
  14. ^ «Микробтық геномды жүйелеу». www.illumina.com. Алынған 2018-02-27.
  15. ^ а б c г. e f Ванг, Цзя-Ван; Ванг, Эми; Ли, Куню; Ванг, Бангмей; Джин, Шунцян; Рейзер, Мишель; Локки, Ричард Ф (2015). «CRISPR / Cas9 нуклеазаның бөлінуі, жіксіз клондау үшін Гибсон жинағымен біріктірілген». Биотехника. 58 (4): 161–70. дои:10.2144/000114261. PMID  25861928.
  16. ^ а б c г. Сю, Руцян; Циншун, Ли Куинн (2008-01-22). «Хаттама: Gateway® TOPO векторлық жүйесі арқылы Agrobacterium-да гендерді екілік векторларға клондауды жеңілдету». Өсімдік әдістері. 4: 4. дои:10.1186/1746-4811-4-4. ISSN  1746-4811. PMC  2257932. PMID  18211693.
  17. ^ а б c г. Петерсен, Лена К .; Стиверс, Р.Стивен (2011-09-09). «Gateway MultiSite рекомбинациялық клондау құралы». PLOS ONE. 6 (9): e24531. Бибкод:2011PLoSO ... 624531P. дои:10.1371 / journal.pone.0024531. ISSN  1932-6203. PMC  3170369. PMID  21931740.
  18. ^ Аман, Рудольф (2000). «Онда кім бар? Биоалуантүрліліктің микробтық аспектілері». Жүйелі және қолданбалы микробиология. 23 (1): 1–8. дои:10.1016 / s0723-2020 (00) 80039-9. PMID  10879972.
  19. ^ Кеннеди, Джонатан; Марчесси, Джулиан Р .; Добсон, Алан DW (2008-08-21). «Теңіз метагеномикасы: теңіз орталарындағы биотехнологиялық қосымшалары бар жаңа ферменттерді табу стратегиясы». Микробты жасуша фабрикалары. 7: 27. дои:10.1186/1475-2859-7-27. ISSN  1475-2859. PMC  2538500. PMID  18717988.
  20. ^ а б c Гарибян, Лилит; Авашия, Нидхи (2013). «Полимеразды тізбектің реакциясы». Тергеу дерматологиясы журналы. 133 (3): 1–4. дои:10.1038 / jid.2013.1. PMC  4102308. PMID  23399825.
  21. ^ а б c г. e Мозер, Майкл Дж .; ДиФранческо, Роберт А .; Гоуда, Кришне; Клингеле, Одри Дж.; Қант, Дарби Р .; Стокки, Стэйси; Мид, Дэвид А .; Шенфельд, Томас В. (2012-06-04). «Вирустық метагеномнан алынған термостабты ДНҚ-полимераза - бұл күшті RT-ПТР ферменті». PLOS ONE. 7 (6): e38371. Бибкод:2012PLoSO ... 738371M. дои:10.1371 / journal.pone.0038371. ISSN  1932-6203. PMC  3366922. PMID  22675552.
  22. ^ а б c г. e f ж Зоммер, Мортен О.А .; Дантас, Гаутам; Шіркеу, Джордж М. (2009-08-28). «Адам микрофлорасындағы антибиотиктерге төзімділік резервуарының функционалды сипаттамасы». Ғылым. 325 (5944): 1128–1131. Бибкод:2009Sci ... 325.1128S. дои:10.1126 / ғылым.1176950. ISSN  0036-8075. PMC  4720503. PMID  19713526.

Сыртқы сілтемелер